[發明專利]一種用于弓形蟲感染預防的疫苗和制備方法及其應用在審

申請號：	201410135529.4	申請日：	2014-04-04
公開（公告）號：	CN103937818A	公開（公告）日：	2014-07-23
發明（設計）人：	黃思揚;徐穎;張念章;徐前明;徐民俊;宋慧群;朱興全	申請（專利權）人：	中國農業科學院蘭州獸醫研究所
主分類號：	C12N15/52	分類號：	C12N15/52;C12N9/00;C12N15/85;A61K48/00;A61K39/002;A61P33/02
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種用于弓形蟲感染預防疫苗制備方法及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于免疫學和分子生物學領域，具體地，涉及一種用于弓形蟲感染預防的疫苗。

背景技術

剛地弓形蟲（Toxoplasma?gondii，T.gondii）是一種專性細胞內寄生原蟲，可引起人獸共患弓形蟲病。弓形蟲可感染包括人類在內的幾乎所有的哺乳類動物，貓科動物是其主要傳染源。全世界約有1/3的成年人感染，我國人群的感染率為5%～20%，家畜動物感染率為10%～50%。作為一種機會致病因子，弓形蟲在正常宿主的機體中多呈隱性感染，無明顯臨床癥狀；但對于器官移植、艾滋病、惡性腫瘤患者等免疫缺陷或免疫抑制者，弓形蟲可能是致死因子之一；孕婦感染弓形蟲可導致流產、死胎以及胎嬰先天性缺陷、發育畸形、腦炎及腦膜炎等。弓形蟲感染可引起家畜發生高熱流產，并能和其他病原微生物協同作用，給全世界的畜牧業造成巨大的經濟損失。使用安全有效的疫苗接種被認為可能是預防弓形蟲病的最佳預防措施。

常用于弓形蟲疫苗研究的候選抗原主要有微線體蛋白（microneme?protein）、棒狀體蛋白（rhoptry?proteins，ROPs）、膜表面抗原（surface?antige,SAG）及致密顆粒蛋白（dense?granule?protein）。其中，微線體是頂復門（Phylum?Apicomplexa）原蟲的一種細胞器，也是弓形蟲重要的具有分泌功能的細胞器，在蟲體入侵宿主細胞階段發揮重要作用。ROPs是速殖子頂端棒狀體分泌的對弓形蟲侵入宿主細胞起重要作用的蛋白質，在蟲體入侵、納蟲空泡（parasitophorous?vacuole，PV）的形成和修飾過程中起著重要作用，它是重要的入侵和毒力作用因子。弓形蟲膜表面蛋白1（major?surface?protein1，SAG1）也是研究最多的疫苗候選分子之一。因此研究與弓形蟲入侵及相關毒力因子的疫苗候選抗原，對于抗弓形蟲疫苗的研究，以及弓形蟲病的預防和控制具有重大意義。

弓形蟲疫苗的研究經歷了全蟲疫苗、蟲體特異組分疫苗、基因工程疫苗以及DNA疫苗，DNA疫苗又包括單基因疫苗和復合基因疫苗。目前，研究較多的是復合多價疫苗和核酸疫苗。各種疫苗均有其優缺點。滅活疫苗的安全性較好，但其抗感染的能力弱；弱毒疫苗有著較好的保護性，但在安全性上一直存在著毒力返強及弓形蟲感染中間宿主后在體內形成組織包囊等問題；基因工程疫苗生產過程復雜、技術難度大、且生產成本較高，其保護力及安全性還有待進一步改進；核酸疫苗具有無需使用佐劑、無需表達和純化重組抗原、且能產生CTL作用、免疫具有持續性及可制成多價疫苗等優點而得到了廣泛的應用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種用于弓形蟲感染預防的疫苗。為此，本發明還提供所述疫苗的制備方法及其應用。

棒狀體蛋白38（ROP38），是一種在不同蟲株間存在不同表達的活性酶，分布于棒狀體內，與弓形蟲PVM的形成有關，而且是繼ROP16和GRA15之后，第三個被發現的能改變宿主信號轉導的蛋白，因此，弓形蟲ROP38有望成為理想的疫苗候選抗原。

本發明提供一種用于弓形蟲感染預防的核苷酸序列，其含有選自以下的核苷酸序列：1）序列表中SEQ?ID?No.1中所示的核苷酸序列；

2）與1）中所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；

3）對上述1）或2）所示核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾，并具有弓形蟲感染預防功能的核苷酸序列。

本發明的第二個目的是提供一種重組蛋白，其氨基酸序列由權利要求1所述的核苷酸序列編碼。

優選地，所述氨基酸序列參見序列表中SEQ?ID?No.2。

本發明的第三個目的是提供一種重組載體，其包括權利要求1所述的核苷酸序列。

本發明的第四個目的是提供一種重組質粒，其核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列。

本發明的第五個目的是提供一種疫苗，其包括權利要求1所述的核苷酸序列，以及醫學上可接受的載體。

本發明的第六個目的是提供上述的核苷酸序列、重組蛋白、重組載體、重組質粒、疫苗在弓形蟲感染預防中的應用。