[發(fā)明專利]一種用于弓形蟲感染預防的疫苗和制備方法及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410135529.4
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103937818A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設計）人: 黃思揚;徐穎;張念章;徐前明;徐民俊;宋慧群;朱興全
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N9/00;C12N15/85;A61K48/00;A61K39/002;A61P33/02
• 代理公司: 北京中恒高博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

1.一種用于弓形蟲感染預防的核苷酸序列，其含有選自以下的核苷酸序列：

1）序列表中SEQ?ID?No.1中所示的核苷酸序列；

2）與1）中所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；

3）對上述1）或2）所示核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾，并具有弓形蟲感染預防功能的核苷酸序列。

2.一種重組蛋白，其氨基酸序列由權(quán)利要求1所述的核苷酸序列編碼。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組蛋白，其特征在于：所述氨基酸序列參見序列表中SEQ?ID?No.2。

4.一種重組載體，其包括權(quán)利要求1所述的核苷酸序列。

5.一種重組質(zhì)粒，其核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?No.3所示的核苷酸序列。

6.一種疫苗，其包括權(quán)利要求1所述的核苷酸序列，以及醫(yī)學上可接受的載體。

7.權(quán)利要求1所述的核苷酸序列、權(quán)利要求2或3所述的重組蛋白、權(quán)利要求4所述的重組載體、權(quán)利要求5所述的重組質(zhì)粒、權(quán)利要求6所述的疫苗在弓形蟲感染預防中的應用。

8.一種權(quán)利要求6所述的疫苗的制備方法，步驟如下：

（1）提取弓形蟲RH株總RNA；

（2）RT-PCR擴增RH株總RNA；

（3）將步驟2中的擴增產(chǎn)物與載體連接；

（4）pVAX?I質(zhì)粒的小量提取；

（5）回收pVAX?I載體及目的片段ROP38；

（6）?連接pVAX?I載體與目的片段ROP38；

（7）將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至宿主菌中。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于：所述RT-PCR擴增RH株總RNA時所用引物為：

上游引物：5′-?CGGGGTACCATGAAAAATACTCTGTTGTCA?-3′；

下游引物：5′-?CGCGGATCCTCAAAATTGATGCGTTCTTAT?-3′。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于：所述RT-PCR擴增RH株總RNA時PCR反應條件為：94℃預變性5min，94℃變性40sec，55℃復性30sec；72℃延伸?1min?35sec；35個循環(huán)，最后，72℃延伸10min。