[發明專利]一種三色熒光標記篩選抗阿霉素腎毒性活性物質的方法

無效

• 申請號: 201410133330.8
• 申請日: 2014-04-03
• 公開（公告）號: CN103969232A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 程翼宇;趙筱萍;王毅
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種三色熒光標記篩選抗阿霉素腎毒性活性物質的方法，包括：

（1）取腎細胞，加入待篩選物質進行預保護；

（2）預保護完成后，加入阿霉素進行損傷；

（3）向損傷后的腎細胞中同時加入具有不同激發和發射波長的細胞膜完整性熒光探針、線粒體膜電位熒光探針與細胞核熒光探針，進行熒光標記；

（4）染色完成后采集、分析細胞熒光圖像，分別計算待篩選物質對腎細胞細胞膜、線粒體和細胞核的保護率；

（5）從待篩選物質中篩選出對腎細胞的細胞膜、線粒體和細胞核的保護率均大于15%的活性物質。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述腎細胞為對數生長期細胞，細胞密度為1～100個/μL。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，預保護時間為15～120min。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，阿霉素的損傷濃度為0.78～100μM，損傷時間為12～48h。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述細胞膜完整性熒光探針為二乙酸熒光素。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述線粒體膜電位熒光探針為MitoTracker Red。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述細胞核熒光探針為hoechst33342。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）中，保護率的計算公式為：

其中，f為加藥保護組的熒光強度，Fm為損傷組的熒光強度，Fc為正常細胞組的熒光強度。