[發明專利]一種含海藻糖的牛卵母細胞體外成熟培養液及培養方法

有效

• 申請號: 201410130174.X
• 申請日: 2014-04-02
• 公開（公告）號: CN103881967A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 王爭光;李正操;俞頌東
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/073
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃芳

1.一種含海藻糖的牛卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于所述牛卵母細胞體外成熟培養液組成如下：海藻糖0.1～1.0mg/mL，大豆甙元0.1～10μg/mL，青霉素100IU/mL，鏈霉素100μg/mL，血清體積百分含量8%～20%，溶劑為常規培養液；所述常規培養液為M199、DMEM、F12、MEM中的一種或多種。

2.如權利要求1所述的牛卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于所述培養液組成如下：

溶劑為M199培養液。

3.利用權利要求1所述牛卵母細胞體外成熟培養液進行牛卵母細胞體外培養及體外受精的方法，所述方法包括：

（1）配制牛卵母細胞體外成熟培養液，組成如下：海藻糖0.1～1.0mg/mL，大豆甙元0.1～10μg/mL，青霉素100IU/mL，鏈霉素100μg/mL，血清體積百分含量8%～20%，溶劑為常規培養液；所述常規培養液為M199、DMEM、F12、MEM中的一種或多種；

（2）將牛卵母細胞體外成熟培養液在一次性塑料培養皿上形成體積為50～100μL的培養小滴，置38～39℃環境中預熱1～3小時，牛卵母細胞經沖洗后放入預熱后的培養小滴，在38～39℃、5%CO₂的環境內培養20～24小時；

（3）用受精培養液在一次性塑料培養皿上形成體積為50～100μL的受精小滴，置38～39℃環境中預熱1～3小時，將儲存在液氮罐中的凍精解凍，然后與步驟（2）培養后的牛卵母細胞一同放入受精小滴，在38～39℃、5%CO₂的環境內培養15～18小時，進行受精，得到受精后的早期胚胎；

（4）用胚胎體外培養液在一次性塑料培養皿上形成體積為50～100μL的培養小滴，置38～39℃環境中預熱1～3小時，將受精后的早期胚胎沖洗后，放入培養小滴中，在38～39℃、5%CO₂的環境內培養。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于步驟（3）所述受精培養液為含5～10mg/mL肝素的BO液、或者Tyrode’s改良液。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于步驟（4）所述胚胎體外培養液為含體積百分比10%血清的SOF培養液。

6.如權利要求3所述的方法，其特征在于步驟（4）所述胚胎體外培養液組成如下：海藻糖0.1～1.0mg/mL，大豆甙元0.1～10μg/mL，青霉素100IU/mL，鏈霉素100μg/mL，血清白蛋白5～10mg/mL，溶劑為SOF培養液。