[發明專利]利用蠶蛹制備降血糖肽的方法

有效

• 申請號: 201410129977.3
• 申請日: 2014-04-02
• 公開（公告）號: CN104031963A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 張玉;王偉;王君虹
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及利用蠶蛹制備降血糖肽的方法。

背景技術

目前，糖尿病已成為繼腫瘤、心血管疾病之后嚴重威脅人類健康的慢性病，是威脅人類健康的三大慢性疾病之一，餐后高血糖是糖尿病的主要風險因子，α－葡萄糖苷酶抑制劑能通過抑制小腸上皮絨毛膜刷狀緣上α－葡萄糖苷酶的活性，減少食物中碳水化合物的消化，延緩葡萄糖的生成，在降低餐后血糖中具有重要作用。目前已開發出一些化學合成的α-葡萄糖苷酶抑制劑(如阿卡波糖片)，并應用于臨床治療。但化學合成的α-葡萄糖苷酶抑制劑對人體能產生一定的副作用，如損害肝臟、導致胃腸氣脹和腸功能紊亂等。

目前人們已從深海魚、牛奶等食物中分離到了具有降血糖活性的多肽。但這些方法原料成本相對較高。

已有研究中，張海娜發現蠶蛹蛋白以堿性蛋白酶和復合蛋白酶制備ACE活性抑制肽，同時具有一定降低小鼠血糖的功效，但活性不高，且未報道其降血糖機制。李國榮通過堿性蛋白酶和復合蛋白酶酶解蠶蛹粉制備的多肽，能抑制酵母的α-葡萄糖苷酶活性，但未涉及動物體α-葡萄糖苷酶的抑制活性，且活性不高。蠶蛹源活性肽針對動物體內α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究尚無報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種成本低、降血糖效果好的利用蠶蛹制備降血糖肽的方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種利用蠶蛹制備降血糖肽的方法，包括如下步驟：

1)、在脫脂干蠶蛹粉中按照1:13～17(較佳為1:15)的重量比加入水后攪勻，然后調節pH值為3.8～4.2(較佳為4.0)，作為反應起始物；于35℃～40℃，在反應起始物中加入為脫脂干蠶蛹粉重量2～3％的酸性蛋白酶，于攪拌狀態下保溫(35℃～40℃)酶解反應3.5～4.5h(較佳為4h)；

將酶解反應所得產物于10min內(一般為5～10分鐘)升溫至95～100℃，并保溫8～12min(較佳為10min)；然后自然冷卻至室溫以終止反應；然后離心，得上清液，該上清液為酶解液；

2)、用脫色活性炭對所述酶解液于35～35℃(較佳為40℃)進行脫色處理，所得的脫色后酶解液經過濾，得粗濾酶解液；

利用截留分子量3Kda的中空纖維聚砜超濾膜(即，聚砜中空纖維超濾膜)對粗濾酶解液進行超濾，工作壓力0.1～0.2Mpa，工作溫度0～45℃(例如為20～45℃)，得到超濾酶解液；

先利用真空濃縮機將此超濾酶解液濃縮至原重的25～40％，然后真空冷凍干燥，得到具有降血糖功能的肽粉(即，降血糖肽)。

作為本發明的利用蠶蛹制備降血糖肽的方法的改進：

步驟1)中酸性蛋白酶的酶活力為5萬U/g。

作為本發明的利用蠶蛹制備降血糖肽的方法的進一步改進：

所述步驟2)中的真空冷凍干燥為：于真空度為65Pa，冷阱溫度為-50℃，物料溫度為-25℃的條件下真空冷凍干燥，直至含水率≤7％(質量％)。

作為本發明的利用蠶蛹制備降血糖肽的方法的進一步改進：

所述步驟1)中的離心為：3500～4500r/min下離心18～22min(較佳為4000r/min離心20min)。

作為本發明的利用蠶蛹制備降血糖肽的方法的進一步改進：

所述步驟2)中的過濾為3層致密紗布袋粗濾。

作為本發明的利用蠶蛹制備降血糖肽的方法的進一步改進：所述步驟2)中：脫色活性炭與酶解液的重量比為9～11％(較佳為10％)；脫色處理時間為1.5～2.5h(較佳為2h)。

備注說明：

1、本發明中作為原料的脫脂干蠶蛹粉或蠶蛹蛋白粉，其含水率均≤1.5％(重量％)；脂肪含量≤3％(重量％)。

2、本發明所指的室溫為10～30℃。

3、本發明的酸性蛋白酶，例如可選用上海源葉生物科技有限公司公司生產的M0010酸性蛋白酶BR。

4、采用本發明方法制備而得的降血糖活性肽的使用方法和用量為口服，每日兩次，每次2-3g。

本發明的利用蠶蛹制備利用蠶蛹制備降血糖肽的方法的方法，具有如下優點：

1)、本發明所制備的降血糖肽是脫脂干蠶蛹或蠶蛹蛋白粉經生物酶水解而得，對高血糖患者具有降血糖的作用，安全、無毒副作用，對血糖水平正常者可起到保健作用，對正常血糖水平無影響。

2)、本發明所采用的原料來源廣泛，價格低廉，經過本發明的技術轉化可以有效的提高絲廠蠶蛹副產物的附加值，對繼續促進桑蠶產業的發展具有重要意義。