[發明專利]試劑盒及確定待測DNA樣本預定SNP位點的基因型的方法

在審

• 申請號: 201410129862.4
• 申請日: 2014-04-01
• 公開（公告）號: CN104975070A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發明（設計）人: 徐謀勝;曹旸;袁亞燕;王珊
• 申請（專利權）人: 湖北維達健基因技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種試劑盒，其特征在于，包括：

第一核酸分子，所述第一核酸分子具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列；

第二核酸分子，所述第二核酸分子具有SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列；

第一探針，所述第一探針具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列；以及

第二探針，所述第二探針具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列，

其中，

所述探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團，

所述第一探針與所述第二探針的熒光報告基團不同。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光報告基團為FAM或VIC，所述淬滅基團為MGB。

3.一種確定待測DNA樣本預定SNP位點的基因型的方法，所述預定SNP位點為VKORC1基因的rs9923231位點，其特征在于，包括：

根據Taqman探針雜交法，利用權利要求1或2所述的試劑盒，將所述待測DNA樣本進行熒光定量PCR；以及

對熒光定量PCR結果進行分析，以便確定待測樣本預定SNP位點的基因型。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，利用熒光定量PCR儀，優選ABI?Stepone熒光定量PCR儀進行所述熒光定量PCR。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR的反應體系為：

5重量份的Taqman?Genotyping?Master?Mix；

3.5重量份的超純水；

0.5重量份的組合物；以及

1重量份的待測DNA樣本，

其中，所述組合物由所述第一核酸分子、第二核酸分子、第一探針和第二探針組成。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述待測DNA樣本的濃度為20ng/μl。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述待測DNA樣本來源于人唾液或外周血。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述組合物中每種核酸分子的濃度均為18μmol/L，每種探針的濃度均為5μmol/L。

9.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR的反應程序為：

第一步：60℃下保持30秒；

第二步：95℃下保持10分鐘；

第三步：92℃下保持15秒；

第四步：60℃下保持90秒；

第五步：循環第三步第四步50次；以及

第六步：60℃下保持30秒。

10.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，利用Stepone?software?V2.1對所述熒光定量PCR結果進行分析。