[發明專利]一種用于鑒別物品真偽的分子內標物及其應用

無效

• 申請號: 201410129433.7
• 申請日: 2014-04-01
• 公開（公告）號: CN103898218A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 梁興國;王鵬飛
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于防偽鑒定技術領域，尤其涉及一種用于鑒別物品真偽的分子內標物及其應用。?

背景技術

針對現在的食品，尤其是名貴白酒類、保健品，目前其防偽措施主要從其外包裝入手。外包裝防偽技術主要包括標識防偽和包裝結構防偽兩大類：標識防偽主要利用高科技技術將各種標識附著于外包裝上，便于消費者識別；包裝結構防偽則從包裝的構造入手，常見的有一次性破壞包裝。然而外包裝容易被仿造，且外包裝上的標識物具有易被劃破、污染或脫落等缺點，這給不法分子留下了可乘之機。許多不法分子在利益的趨勢下，制假售假，謀取不法利益。?

傳統的外包裝防偽技術有許多缺點，針對這一現狀，許多研究人員試圖將一些特殊物質直接或者間接加入到液態食品內，用以作為商品的身份內標，可以通過檢測其內標物來判斷商品的真偽，保護商家和消費者的利益。國內外也有關于這方面的報道，例如國內的一篇專利報道，其將動物、植物、微生物或人工合成的基因組DNA或基因片段加入到白酒內作為其內標物，檢測時，用乙醇沉淀法提取加入的DNA，再運用PCR技術進行擴增，最后通過凝膠電泳成像觀察擴增產物是否與內標物相符，最終來判斷商品的真偽。但是，這種方法的不足之處在于，由于是將核酸分子加入到食品內，PCR擴增技術可能會受?到食品內所含核酸分子的干擾，出現假陽性結果，另外，PCR擴增技術的反應溫度需要特殊儀器控制，引物設計也很繁瑣。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于鑒別物品真偽的分子內標物及其應用，旨在解決傳統PCR擴增技術等會受到食品內所含核酸分子的干擾、出現假陽性結果，以及擴增引物設計麻煩的問題。?

本發明是這樣實現的，一種用于鑒別物品真偽的分子內標物，包括核苷酸序列1和核苷酸序列2；其中，?

所述核苷酸序列1組成為：長度為35～45nt，5’端18～22nt的序列為能形成發卡結構的回文序列，該序列內含有一個限制性內切酶的酶切位點1；3’端剩余長度的序列不能形成發卡結構，該序列內部含有一個限制性內切酶酶切位點2；?

核苷酸序列2組成為：長度為35～45nt，5’端18～22nt序列長度為回文序列，能夠形成發卡結構，該序列內部含有一個限制性內切酶的酶切位點1；3’端剩余長度的序列不能形成發卡結構，該序列內部含有一個限制性內切酶酶切位點2；?

所述核苷酸序列1和核苷酸序列2中不能形成回文結構的序列部分互補配對。?

優選地，所述核苷酸序列1和/或核苷酸序列2的5’端18～22nt序列中還含有若干個不同的限制性內切酶的酶切位點。?

優選地，所述核苷酸序列1和核苷酸序列2的3’端剩余長度序列中還含?有若干個不同的限制性內切酶的酶切位點，且所述核苷酸序列1和核苷酸序列2的3’端剩余長度序列能夠互補配對。?

本發明進一步提供了上述的用于鑒別物品真偽的分子內標物的應用，包括以下步驟：?

（1）將權利要求1至3任一項所述核苷酸序列1和核苷酸序列2加入到不同型號、不同批次的物品中；?

（2）對所述物品中核苷酸序列1和核苷酸序列2進行恒溫擴增；?

（3）對擴增產物進行檢測，確定物品真偽。?

優選地，在步驟（1）中，所述物品包括食品和其它商品。?

優選地，在步驟（2）中，所述恒溫擴增過程包括：當核苷酸序列1和核苷酸序列2存在于反應體系時，兩條鏈中不能形成發卡結構的序列部分會退火相結合，形成一段不完整的雙鏈，之后在聚合酶的作用下補齊形成完整雙鏈DNA，雙鏈DNA分子末端會在較高溫度下部分解鏈，自身會形成鏈內發卡結構，發卡結構的3’-末端可以作為引物在聚合酶的作用下會繼續合成變長，周而復始，最終生成長鏈DNA。?

優選地，在步驟（3）中，所述檢測的方法包括：凝膠電泳檢測、酶標儀產物含量檢測以及內切酶酶切鑒定。?

優選地，所述內切酶酶切鑒定包括：根據核苷酸序列1和核苷酸序列2上的酶切位點，用相應的一種或多種限制性內切酶對擴增產物進行特異性酶切，凝膠電泳成像檢測酶切產物并鑒別物品真偽。?

本發明克服現有技術的不足，提供一種用于鑒別物品真偽的分子內標物及其應用，通過設計兩條核酸序列做為分子內標物直接加入到液態食品或間接附于其他商品上；待需要檢驗其真偽時，運用特定的擴增及檢測方法檢測內標物的存在與否，以判斷該液態食品或商品的真偽。?