[發明專利]一種用于鑒別物品真偽的分子內標物及其應用

無效

• 申請號: 201410129433.7
• 申請日: 2014-04-01
• 公開（公告）號: CN103898218A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 梁興國;王鵬飛
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種用于鑒別物品真偽的分子內標物，其特征在于，包括核苷酸序列1和核苷酸序列2；其中，

所述核苷酸序列1組成為：長度為35～45nt，5’端18～22nt的序列為能形成發卡結構的回文序列，該序列內含有一個限制性內切酶的酶切位點1；3’端剩余長度的序列不能形成發卡結構，該序列內部含有一個限制性內切酶酶切位點2；

核苷酸序列2組成為：長度為35～45nt，5’端18～22nt序列長度為回文序列，能夠形成發卡結構，該序列內部含有一個限制性內切酶的酶切位點1；3’端剩余長度的序列不能形成發卡結構，該序列內部含有一個限制性內切酶酶切位點2；

所述核苷酸序列1和核苷酸序列2中不能形成回文結構的序列部分互補配對。

2.如權利要求1所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物，其特征在于，所述核苷酸序列1和/或核苷酸序列2的5’端18～22nt序列中還含有若干個不同的限制性內切酶的酶切位點。

3.如權利要求1或2所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物，其特征在于，所述核苷酸序列1和/或核苷酸序列2的3’端剩余長度序列中還含有若干個不同的限制性內切酶的酶切位點，且所述核苷酸序列1和核苷酸序列2的3’端剩余長度序列互補配對。

4.權利要求1至3任一項所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物的應用，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將權利要求1至3任一項所述核苷酸序列1和核苷酸序列2加入到不同型號、不同批次的物品中；

（2）對所述物品中加入的核苷酸序列1和核苷酸序列2進行恒溫擴增；

（3）對擴增產物進行檢測，確定物品真偽。

5.如權利要求4所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物的應用，其特征在于，在步驟（1）中，所述物品包括液態食品和其它商品。

6.如權利要求5所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物的應用，其特征在于，在步驟（2）中，所述恒溫擴增過程包括：當核苷酸序列1和核苷酸序列2存在于反應體系時，兩條鏈中不能形成發卡結構的序列部分會退火相結合，形成一段不完整的雙鏈，之后在聚合酶的作用下補齊生成完整雙鏈DNA，雙鏈DNA分子末端會在較高溫度下部分解鏈，自身會形成鏈內發卡結構，發卡結構的3’末端可以作為引物在聚合酶的作用下會繼續合成變長，周而復始，最終生成長鏈DNA。

7.如權利要求6所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物的應用，其特征在于，在步驟（3）中，所述檢測的方法包括：凝膠電泳檢測、酶標儀產物含量檢測以及內切酶酶切鑒定。

8.如權利要求7所述的用于鑒別物品真偽的分子內標物的應用，其特征在于，所述內切酶酶切鑒定包括：根據核苷酸序列1和核苷酸序列2上的酶切位點，用相應的一種或多種限制性內切酶對擴增產物進行特異性酶切，凝膠電泳成像檢測酶切產物并鑒別物品真偽。