[發明專利]CRY報告基因載體的構建方法及其應用有效
| 申請號： | 201410126537.2 | 申請日： | 2014-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN103937825A | 公開（公告）日： | 2014-07-23 |
| 發明（設計）人： | 張傳茂;張博言 | 申請（專利權）人： | 北京大學 |
| 主分類號： | C12N15/65 | 分類號： | C12N15/65;C12N15/79;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100871*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | cry 報告 基因 載體 構建 方法 及其 應用 | ||
1.CRY報告基因載體的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括以下步驟：
（1）將Rabin8蛋白中與Rab8特異性結合的氨基酸序列RBD連入真核表達載體pECFP，構成CFP-RBD序列；
（2）將上述CFP-RBD序列進行克隆，再連入真核表達載體pEYFP，構成CFP-RBD-YFP序列，得到報告基因載體CRY；
所述Rabin8蛋白中與Rab8特異性結合的氨基酸序列RBD如SEQ?ID?No.1所示。
2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述構建方法可先將Rabin8蛋白中與Rab8特異性結合的氨基酸序列RBD連入真核表達載體pEYFP，構成RBD-YFP序列；再將上述RBD-YFP序列進行克隆，再連入真核表達載體pECFP，構成CFP-RBD-YFP序列。
3.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述真核表達載體pECFP為pECFP-C1/2/3或pECFP-N1/2/3。
4.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述真核表達載體pEYFP為pEYFP-C1/2/3或pEYFP-N1/2/3。
5.權利要求1-4任意一項所述的構建方法構建得到的報告基因載體CRY。
6.根據權利要求5所述的報告基因載體CRY，其特征在于，報告基因載體CRY的報告基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。
7.權利要求5或6所述的報告基因載體在檢測細胞內Rab8GDP中的應用，其特征在于，利用報告基因載體CRY的報告基因所編碼的蛋白定位及識別Rab8GDP，并對細胞內游離狀態的Rab8GDP進行半定量分析和定位分析，從而特異性追蹤細胞內Rab8GDP的變化。
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