[發(fā)明專利]一種用于預(yù)防病毒性心肌炎的重組病毒及其疫苗和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410125958.3
• 申請(qǐng)日: 2014-03-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103865890B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊思東;董春升;徐薇;吳飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/86;A61K48/00;A61K39/125;A61P31/14;A61P9/00;C12R1/93
• 代理公司: 蘇州廣正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司32234
• 代理人: 張利強(qiáng)

1.一種重組病毒，其特征在于 ：以水皰型口炎病毒為載體，在所述的水皰型口炎病毒 的囊膜糖蛋白 G 和聚合酶蛋白 L 之間插入編碼靶抗原 CVB3 結(jié)構(gòu)蛋白 VP1 基因，所述的編碼靶抗原 CVB3 結(jié)構(gòu)蛋白 VP1 基因的序列如 SEQ ID NO ：1 所示；

所述重組病毒的制備方法如下：（1）選擇靶抗原 CVB3 結(jié)構(gòu)蛋白 VP1 基因，以質(zhì)粒 pXN2 為載體，在所述的 pXN2 載體中插 入編碼靶抗原 CVB3 結(jié)構(gòu)蛋白 VP1 基因，得到質(zhì)粒 pXN2-VP1 ；（2） 在培養(yǎng)皿中培養(yǎng) BHK 細(xì)胞，待細(xì)胞長(zhǎng)滿 40~70% 的時(shí)候，收集 BHK 細(xì)胞 ；（3）用含有 T7 RNA 聚合酶的痘病毒在無(wú)血清 DMEM 培養(yǎng)基中與 BHK 細(xì)胞共孵育，然后用 脂質(zhì)體將水皰型口炎病毒的反向遺傳重組質(zhì)粒 pXN2-VP1、 pP、 pL、 pN、和 pVSVG 的五質(zhì)粒系 統(tǒng)轉(zhuǎn)染到 BHK 細(xì)胞中，36-60h 后收集細(xì)胞上清，過(guò)濾膜后高速離心，所述的離心濃縮后的病毒分裝溶解在 PBS 中備用，所述 CVB3 結(jié)構(gòu)蛋白VP1來(lái)源于 CVB3 Nancy 株。

2.如權(quán)利要求 1 所述的一種重組病毒，其特征在于 ：所述的水皰型口炎病毒來(lái)源于水皰型口炎病毒印第安納株。

3.如權(quán)利要求 1 所述的一種重組病毒，其中所述BHK細(xì)胞為BHK21 細(xì)胞。

4.一種疫苗，其特征在于 ：含有有效量的權(quán)利要求 1 所述的重組病毒。

5.權(quán)利要求 1所述的重組病毒或者權(quán)利要求 4所述的疫苗在制備預(yù)防病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用。