[發明專利]一種從山莓葉中分離對羥基肉桂酸乙酯的方法及用途

有效

• 申請號: 201410124854.0
• 申請日: 2014-03-31
• 公開（公告）號: CN103922935A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 常云佩;劉曉娟;曹庸;劉欣;周麗萍
• 申請（專利權）人: 曹庸
• 主分類號: C07C69/732
• 分類號: C07C69/732;C07C67/48;A61P1/12
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體地說，是涉及一種山莓葉具有抑制腸蠕動、抗腹瀉作用的化合物對羥基肉桂酸乙酯的分離方法以及該化合物的用途。?

背景技術

山莓（Rubus?corchorifolius?L.f）是薔薇科懸鉤子屬植物，在我國除東北、甘肅、新疆、西藏外，全國均有分布，野生資源蘊藏量相當大。山莓是湘西、鄂西北等地區少數民族長期使用的傳統中草藥，在湘西地區群眾常將嫩葉搗碎飼喂動物治療腹瀉，效果良好，是民間公認的安全、有效的抗腹瀉秘方。朱深海及本實驗室前期研究表明：山莓葉提取物對家兔離體十二指腸、空腸、回腸、結腸的運動均有抑制作用，這一研究有提示我們繼續研究山莓葉中抑制腸蠕動的活性成分。但目前對于山莓葉中具有抑制腸蠕動的化合物沒有報道。?

發明內容

??本發明的目的在于提供一種從山莓葉中分離化合物對羥基肉桂酸乙酯的方法，該化合物具有抑制腸蠕動活性。?

本發明提供的從山莓葉中分離的化合物，化學名為：對羥基肉桂酸乙酯，結構式如式（I）所示：?

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????????????????????????????????（I）

其分離方法包括以下步驟：

（1）將山莓葉用濃度為80~100%乙醇60℃水浴加熱旋轉提取3~5次，山莓葉與乙醇質量體積比為1g:15～20mL，每次2h，合并提取液，真空濃縮回收溶劑，得提取物浸膏；

（2）將提取物浸膏加水溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取液，減壓回收溶劑，得各提取部位粉末；以抗家兔離體腸運動實驗為活性跟蹤模型，得出其活性段主要集中在乙酸乙酯層；

（3）將乙酸乙酯層萃取物進行硅膠柱色譜分離，先用中壓柱層析分離，洗脫劑選用石油醚與乙酸乙酯，乙酸乙酯與甲醇進行梯度洗脫，洗脫的流速為?15?mL/min，柱層析的檢測波長分別為?220?nm、265?nm，同時每管收集的流份量為20?mL；進行家兔離體腸運動實驗，篩選出其抗腹瀉活性強的組分；

（4）將抗腹瀉活性強的組份進行低壓硅膠柱層析分離純化，用氯仿與甲醇進行梯度洗脫，每20?mL?收集一瓶，通過薄層層析法分析，將含有相同組分的流份合并，并進行家兔離體腸運動實驗，篩選出其抑制作用最強的組分，將該組分用反相ODS填料開放柱進行柱色譜分離，用甲醇-水洗脫，得到該化合物。

步驟（1）中，加熱旋轉提取3次，山莓葉與乙醇質量體積比分別為1g:7mL，1g:4mL，1g:4mL。?

步驟（3）中，用石油醚與乙酸乙酯進行梯度洗脫時，石油醚和乙酸乙酯的體積配比依次為100:0、50:50、20:80，乙酸乙酯與甲醇進行梯度洗脫時，乙酸乙酯和甲醇的體積配比依次為100:0、80:1、40:1、20:l、10:l、5:1、l:l、0:1。?

步驟（4）中，用氯仿與甲醇進行梯度洗脫洗脫時，氯仿和甲醇的體積配比依次為25:1，20:1?，15:1?，10:1?，5:1。?

經核磁共振檢測分析和高分辨質譜分析，確定本發明提取的化合物為對羥基肉桂酸乙酯，首次從山莓葉中獲得，且經兔離體十二指腸運動實驗驗證，它能顯著抑制兔離體十二指腸的收縮張力，同時減小腸道蠕動頻率，表現出很強的抑制腸蠕動的作用，在5~160?mg/mL濃度范圍內，抑制效果優于阿托品。因此，可以用于制備新的天然抗腹瀉藥物。?

附圖說明

圖1?對羥基肉桂酸乙酯及阿托品對家兔離體十二指腸張力增量變化率的影響。?

具體實施方式

現結合實施例，對本發明作詳細描述。?

實施例1?制備本發明所得化合物并檢驗其活性?

????1、制備山莓葉提取物

將5?Kg中草藥山莓葉，用85%乙醇60℃水浴加熱旋轉提取3次，山莓葉質量（g）與乙醇體積（mL）比分別為1:7，1:4，1:4，每次2?h，合并提取液，真空濃縮回收溶劑，得提取物浸膏；

????2、篩選抑制腸蠕動活性部位

????將浸膏加水溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，將溶解好的液體每次加入1/5體積的萃取劑，萃取約15-20次，至萃取劑顏色接近無色為止。分別得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取液，減壓回收溶劑，得各提取部位粉末；以抗家兔離體腸運動實驗為活性跟蹤模型，得到萃取后，其活性段主要集中在乙酸乙酯層；

3、抗家兔離體腸運動活性單體制備及活性研究