[發明專利]一種快速提取真菌基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 201410124660.0
• 申請日: 2014-03-31
• 公開（公告）號: CN104946622A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 邊銀丙;王剛正;樊曉琳
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種快速提取真菌基因組DNA的方法，步驟如下：

（1）取材：放置-70℃保持的菌絲或者子實體，放到預冷的研缽中；

（2）加入液氮研磨至粉末狀，將粉末加入滅菌的離心管中；

（3）加入裂解液，混勻，所述的裂解液的配方為：100mM?Tris-HCl?(pH=7.8),20mM?EDTA,?1.4M?NaAc,?2%?CTAB,?0.5%?SDS；

（4）加入PCA，混勻，PCA配方為：氯仿：苯酚：異戊醇=25:24:1，體積比；?

（5）離心；

（6）取上層水相至另一離心管中，加入3M醋酸鈉，再加入預冷的無水乙醇，-20℃放置5-10min；

（7）離心；

（8）棄上清，用75%的酒精漂洗沉淀，離心，棄上清；

（9）加入ddH₂O和RNase,溶解，-20℃保存。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的菌絲或子實體選自：香菇(Lentinula?edodes)，赤芝（Ganoderma?lucidum）、茯苓（Poriacocos）、茶樹菇（Agrocybe?cylindracea）、金針菇（Flammulina?velutipes）、杏鮑菇（Pleurotus?eryngii）、毛木耳（Auricularia?polytricha）、蛹蟲草(Cordycepts?militars）或綠色木霉（Trichodermaviride）。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3）中，加入裂解液后，混勻時間為10-15s。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（4）中，加入PCA后，混勻時間為30s。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（5）中，離心的轉速為12000rpm，離心時間為2min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（5）離心后，若中間層有白色沉底，重復步驟（4）和（5）直至無白色沉底。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（6）中加入乙醇的體積為水相的2倍，加入的醋酸鈉體積為水相的1/10。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（7）中離心的轉速為12000rpm，離心時間為2min。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（8）中75%酒精漂洗兩次；離心轉速為12000，離心時間為30s。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（9）中RNase的濃度為10mg/ml。