[發明專利]一種通過烏司他丁親和層析介質制備純品烏司他丁的方法

有效

• 申請號: 201410123449.7
• 申請日: 2014-03-31
• 公開（公告）號: CN103880951A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 陳備戰;辛瑜;熊蔚;劉蘭花
• 申請（專利權）人: 南昌市萬華生化制品有限公司
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C07K1/22
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種通過烏司他丁親和層析介質制備純品烏司他丁的方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步驟：

第一方面，一種烏司他丁親和層析介質的合成方法，其合成方法如下：

（1）活化：取親和層析介質sephadex,先用10-12倍純水洗滌，過濾抽干；

再加入活化緩沖液A，在40-45℃下攪拌2.5-3.5h，然后過濾，再用純化水洗滌后過濾抽干；

（2）親水間隔臂的連接：活化后的親和層析介質sephadex加含5%-10%的1，3-二氨基-2-羥基丙烷的水溶液，而后在加熱至60-70℃后攪拌，再用純化水洗滌后過濾抽干；

（3）疏水間隔臂的連接：加三聚氯嗪的水-丙酮溶液，通過氫氧化鈉調pH值至7.5-8.5，冷卻至4-8℃攪拌，再用純化水洗滌，過濾抽干；

（4）連接上親和配體：加聚賴氨酸水溶液，攪拌，調pH值至9-10，用純化水洗滌，過濾抽干即可；

第二方面，制備純化的烏司他丁，其制備方法如下：

（1）取烏司他丁親和層析介質，裝柱，用PH值為7.0-8.0的磷酸鹽緩沖液沖洗平衡親和層析介質；

（2）將含有烏司他丁粗品，加入2-3倍的水溶液進行解析，然后過濾、將溶液濃縮至3.5-4.5L，取濃縮液；

（3）將上述（2）的濃縮液通過烏司他丁親和介質進行吸附，然后采用pH值為7.0-8.0洗脫緩沖液B沖洗親和介質，用以洗滌雜質；

（4）最后用PH值為7.5-9.5的洗脫緩沖液Ｃ洗脫親和介質上吸附的烏司他丁，收集純化后的烏司他丁溶液，濃縮、冷凍干燥即得。

2.根據權利要求1所述的一種通過烏司他丁親和層析介質制備純品烏司他丁的方法，其特征在于：所述親和層析介質sephadex為sephadex?G75。

3.根據權利要求1所述的一種通過烏司他丁親和層析介質制備純品烏司他丁的方法，其特征在于：所述親和配體聚賴氨酸的分子大小為聚賴氨酸3000。

4.根據權利要求1所述的一種通過烏司他丁親和層析介質制備純品烏司他丁的方法，其特征在于：所述緩沖液A為0.5?M?NaOH,?10%?二甲亞砜，6%環氧氯丙烷，所述緩沖液B為磷酸鹽溶液，所述緩沖液C為甘氨酸溶液。