[發明專利]在水稻中高效表達Bt蛋白Cry30Fa1的方法

有效

• 申請號: 201410119119.0
• 申請日: 2014-03-27
• 公開（公告）號: CN103937816A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 朱軍;張欽斌;李平;鄧其明;李雙成;劉懷年;王世全;王玲霞;鄭愛萍
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N15/32
• 分類號: C12N15/32;C12N15/75;C12N1/21;C12N15/11;C12N15/84;A01H5/00;A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.編碼Bt蛋白Cry30Fa1的基因，其特征在于，其核苷酸序列為：

i）Seq?ID?No.1；或

ii）Seq?ID?No.1所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且表達相同功能蛋白質的核苷酸序列；或

iii）在嚴格條件下與Seq?ID?No.1所示序列雜交的核苷酸序列；

所述嚴格條件為在含0.1%SDS的0.1×SSPE或含0.1%SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。

2.含有權利要求1所述基因的載體。

3.含有權利要求1所述基因的工程菌。

4.權利要求1所述基因或權利要求2所述載體在制備轉基因植物中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述植物為水稻。

6.用于擴增權利要求1所述基因的特異性引物對，其特征在于，包括正向引物F5'-GCGCATATGATGAAGCCGTACCAGAGCGAGAAT-3'和反向引物R5'-CGGAATTCTTAGTTCACTGGACAAGCAAACGCA-3'。

7.一種在水稻中高效表達Bt蛋白Cry30Fa1的方法，其特征在于，采用農桿菌介導的方法，將權利要求2所述的載體轉入水稻愈傷組織中，轉化的材料經過共培養-篩選-分化-生根-轉基因苗的鍛煉和移栽，篩選高效表達Bt蛋白Cry30Fa1的轉基因水稻植株。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述載體為植物雙元表達載體。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述載體的出發載體為pCDMAR-Hyg。

10.根據權利要求7-9任一項所述的方法，其特征在于，使用的水稻品種為蜀恢818。