[發明專利]鑒定龜甲的PCR特異引物及其檢測方法有效
| 申請號： | 201410119005.6 | 申請日： | 2014-03-28 |
| 公開（公告）號： | CN104946729B | 公開（公告）日： | 2019-11-15 |
| 發明（設計）人： | 黃璐琦;袁媛;蔣超;李曼 | 申請（專利權）人： | 中國中醫科學院中藥研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司 | 代理人： | 關暢<國際申請>=<國際公布>=<進入國 |
| 地址： | 100700北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鑒定 龜甲 pcr 特異 引物 及其 檢測 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種鑒定龜甲的特異引物F1、F2，其序列為：
F1：5′-TTTGGAAACTGACTTGTACCTTTAACG-3′
F2：5′-GAGTAGTAATAGGACGGCTGTAATAAGTAGA-3′。
2.一種龜甲的PCR鑒定方法，其特征在于，包括下列步驟：
a)從所述材料中提取得到DNA樣品；
b)用權利要求1所述的引物進行PCR反應，PCR反應參數為95℃預變性5min后，進行30次循環，循環參數為95℃30s，55-65℃45s，后延伸72℃5min，獲得擴增產物；
c)電泳所述擴增產物，如果存在分子量360bp的單一DNA條帶，則確定所檢材料為龜甲；
d)直接在所述擴增產物中加入2μL20×SYBR Green I染料，振蕩30s充分混勻，于365nm紫外燈下檢測PCR產物；如果反應產物發出強烈綠色熒光，則確定所檢材料為龜甲。
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