[發(fā)明專利]一種強(qiáng)效降壓磷酸肽及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410118129.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-27
• 公開（公告）號(hào): CN103864896A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 隋少卉;董俊軍;蔣志剛;李建;吳為輝;蔣輝;劉基偉;張鳴;閻亮;劉斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍防化學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K1/22;C07K1/107;C07K1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種強(qiáng)效降壓磷酸肽及其制備方法，屬多肽的序列改造及其化學(xué)合成制備技術(shù)領(lǐng)域，在醫(yī)藥等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

背景技術(shù)

多肽類生化物質(zhì)具有“劑量低、活性高、起效快、安全比高、副作用小”等小分子物質(zhì)無可比擬的優(yōu)點(diǎn)，其中麝香蛸素(Eledoisin)是從麝香蛸(Eledone)中提取得到的含11個(gè)氨基酸的多肽，具有強(qiáng)烈的外周血管舒張及增加冠脈血流量的作用，是已知肽類中最有效的降壓物質(zhì)，其效應(yīng)比硝酸甘油強(qiáng)數(shù)千倍。因此麝香蛸素類多肽在醫(yī)藥等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。但麝香蛸素存在一個(gè)致命缺點(diǎn)是，很容易被體內(nèi)活性酶酶解失效，作用持續(xù)時(shí)間極短，限制了其有效應(yīng)用。

麝香蛸素的多肽序列為Pyr-Pro-Ser-Lys-Asp-Ala-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH₂，對(duì)其序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造有望進(jìn)一步提高其活性和作用持續(xù)時(shí)間，但該方面的研究目前尚無文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于對(duì)麝香蛸素多肽序列進(jìn)行改造，設(shè)計(jì)新的多肽序列，提高其降壓活性、延長(zhǎng)其作用持續(xù)時(shí)間。并提供改造后多肽序列的制備方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

由于磷酸肽通常具有很高活性，在生命過程中發(fā)揮重要作用，磷酸化的位置通常在帶有羥基的絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)上。觀察到麝香蛸素多肽序列中從羧基端開始第9位氨基酸為Ser，所以本發(fā)明的序列改造設(shè)計(jì)如下：

將9位Ser進(jìn)行磷酸化修飾，得到磷酸肽1的序列：

Pyr-Pro-Ser(PO₃H)-Lys-Asp-Ala-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH₂

將9位Ser進(jìn)行磷酸化修飾，并將4位Ile替換為Tyr，進(jìn)行磷酸化修飾，得到磷酸肽2的序列：

Pyr-Pro-Ser(PO₃H)-Lys-Asp-Ala-Phe-Tyr(PO₃H)-Gly-Leu-Met-NH₂

對(duì)其進(jìn)行化學(xué)合成和純化的具體步驟如下：

(1)帶有保護(hù)基的多肽片段的合成：先后用N，N-二甲基甲酰胺DMF、N，N-二甲基甲酰胺DCM∶氯甲烷＝1∶2的混合液浸泡RINK?AMIDE-MBHA樹脂，然后用20％哌啶/DMF溶液脫除樹脂上的Fmoc基團(tuán)，接著在樹脂中加入羧基端的第一個(gè)氨基酸Fmoc-Met-OH，4倍Fmoc-Met-OH摩爾數(shù)的TBTU/HoBt/DIEA/DMF溶液，將第一個(gè)氨基酸耦合到樹脂上，用DMF、DCM、DMF各洗滌三遍，用kaiser’s試劑檢測(cè)反應(yīng)完全，再用20％哌啶/DMF脫除羧基端的第一個(gè)氨基酸Fmoc-Met-OH氨基的Fmoc保護(hù)，用DMF、DCM、DMF各洗滌三遍，用kaiser’s試劑檢測(cè)已脫除，之后依次加入Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ile-OH或Fmoc-Tyr-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser-OH、Fmoc-Pro-OH、Boc-Pyr-OH，按上述的耦合、洗滌、檢測(cè)、脫保護(hù)條件進(jìn)行，從而使多肽鏈延長(zhǎng)，直到最后一個(gè)氨基酸Boc-Pyr-OH連接上為止，形成連有樹脂的帶有保護(hù)基的多肽Pyr-Pro-Ser-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Ala-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH2或Pyr-Pro-Ser-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Ala-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2；

(2)磷酸化修飾：先用亞磷酰胺試劑二苯基N，N′-二異丙基亞磷酰胺在四氮唑催化下，將含有絲氨酸Ser、酪氨酸Tyr、蘇氨酸Thr中的一種或以上的多肽生成亞磷酸三酯，然后用氧化劑過氧化叔丁醇，將其氧化成相應(yīng)的磷酸三酯：連有樹脂的帶有保護(hù)基的多肽Pyr-Pro-Ser(PO3H)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Ala-Phe-lle-Gly-Leu-Met-NH2或Pyr-Pro-Ser(PO3H)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Ala-Phe-Tyr(PO3H)-Gly-Leu-Met-NH2；