[發明專利]一種林蛙皮膠原蛋白微粉的制備方法

有效

• 申請號: 201410117658.0
• 申請日: 2014-03-27
• 公開（公告）號: CN103882084A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 張梅;王佳冕;鄧旭明;徐文宇;張俞靜;李雪琪
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 王恩遠

1.一種林蛙皮膠原蛋白微粉的制備方法，其特征為步驟如下：

（1）林蛙皮膠原蛋白肽的制備

①脫色：稱取干燥林蛙皮，用水浸泡至舒展變軟后，加入到0.05mol/L的NaOH水溶液和1%w/vH₂O₂水溶液的混合溶液中浸沒靜置，其中NaOH水溶液與H₂O₂水溶液的體積比為1～3:1，攪拌，每2～4h更換一次混合溶液，直至溶液中無可見色素產生，將林蛙皮用蒸餾水清洗，于25～45℃烘干；

②脫脂：將烘干后的林蛙皮放入丙酮中浸沒靜置，恒溫25±10℃，攪拌2～3d，期間每3-4h更換一次丙酮，以蒸餾水洗去林蛙皮上的殘余脂肪；

③酸酶提?。簩⒚撝⒚撋幚砗蟮牧滞芷し湃?.5～1mol/L乙酸水溶液中，林蛙皮與乙酸水溶液的質量體積比為1:100g/ml，并加入規格為3.000-3.500NFU/mg的胃蛋白酶，林蛙皮與胃蛋白酶的質量比為20～100:1，置于35±10℃恒溫水浴中，攪拌24～96h，得林蛙皮的酸酶提取液；

④乙二胺四乙酸滅酶活：向林蛙皮的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中林蛙皮與乙二胺四乙酸質量比為33～167:1，靜置1～10h；

⑤離心：將靜置后的林蛙皮酸酶提取液離心10～30min，轉數為4000～10000r/min，合并收集上清液；

⑥鹽析：向上述上清液中加入NaCl，使NaCl濃度為4～5mol/L，攪拌12～24h后，靜置12～24h，以轉數5000～10000r/min離心20～40min，除去上清液，取沉淀溶于三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，其中每1L緩沖溶液中含有NaCl1mol和三羥甲基氨基甲烷0.1mol，并加入HCl調節PH值至7.2～7.6，且林蛙皮與緩沖溶液的質量體積比為1:20～50g/mL，向上述緩沖溶液加入NaCl，使NaCl的濃度為1.7～2.4mol/L，靜置12h，以轉數5000～10000r/min，離心30～60min，得沉淀；

⑦透析：將上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且林蛙皮與乙酸水溶液的質量體積比為1:10～50g/mL，將乙酸水溶液裝入透析袋中，再將透析袋浸入蒸餾水中透析3～7d，更換蒸餾水至其中無氯離子產生；

⑧聚乙二醇20000濃縮：將上述透析袋埋到固體聚乙二醇20000中，更換浸濕的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液濃縮至原體積的1/2；

⑨冷凍干燥：將上述濃縮后的溶液經預凍后，放入凍干機中真空冷凍干燥，制得林蛙皮膠原蛋白肽；

（2）林蛙皮膠原蛋白微粉的制備

①取林蛙皮膠原蛋白肽制成濃度為0.05～0.10g/ml的醋酸溶液，攪拌12h；

②調節靜電紡絲條件中的電壓至15～20V、紡絲距離10～15cm、紡絲速度1～2ml/h，電紡得林蛙皮膠原蛋白纖維膜，用砂紙將該纖維膜從錫箔打磨下來，收集得林蛙皮膠原蛋白微粉。