[發明專利]與奶牛乳脂率性狀相關的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201410116914.4
• 申請日: 2014-03-26
• 公開（公告）號: CN103911374A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 俞英;董易春;王曉;劉超
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種與奶牛乳脂率性狀相關的分子標記，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?No.1所示，在第204位有1個T204-G204堿基突變，導致奶牛乳脂率性狀出現多態性。

2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，所述堿基突變的位點位于TRAPPC9基因的第七內含子的57bp處。

3.用于擴增權利要求1所述分子標記的引物對，其特征在于，其核苷酸序列如下：

正向引物F：5’-TCTTCTCTTTTGACCCTACAG-3’；

反向引物R：5’-GGTTTCAAGTTCTGACTCCAG-3’。

4.權利要求1所述的分子標記在中國荷斯坦奶牛乳脂率標記輔助選擇中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，包括如下步驟：

1）取待檢測奶牛的基因組DNA；

2）以基因組DNA為模板，利用權利要求3所述引物對進行PCR擴增，獲得中國荷斯坦奶牛TRAPPC9基因上274bp的目的片段；

3）利用SnaPshot技術檢測PCR產物，如果擴增產物序列中204bp處為T，則待測奶牛屬于乳脂率高的中國荷斯坦奶牛優勢品種。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟2）中PCR反應體系為25μL，其中100ng/μL基因組DNA模板1μL，10pmol/μL引物F和R各1μL，12.5μL?Premix?TaqTM，9.5μL?ddH2O。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟2）中PCR反應條件為：95℃預變性10min；94℃變性30s，60℃復性30s，72℃延伸30s，35個循環；72℃延伸10min；降溫至4℃保持。

8.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟3）中利用SnaPshot技術檢測PCR產物，具體步驟為：取步驟2）獲得的PCR產物3ul用ExoI和FastAP純化，純化后利用SNP分型延伸引物進行延伸，延伸之后上機進行測序。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述SNP分型延伸引物的核苷酸序列為：5’-TTTTTTTTTTTTTTTTAGCAAAACCAGATGGACTTGTG-3’。

10.一種檢測中國荷斯坦奶牛高乳脂率的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：正向引物F、反向引物R、SNP分型延伸引物以及Premix?TaqTM、ExoI、FastAP、ExoI?buffer、Snapshot?Mix中的一種或多種；

其中Premix?TaqTM由dNTPs、DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR緩沖液組成。