[發(fā)明專(zhuān)利]一種提高半胱氨酸利用率生物合成谷胱甘肽的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410116362.7
• 申請(qǐng)日: 2014-03-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103849639A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許激揚(yáng);卞筱泓;劉榮;趙玉成;沃龍飛;張雪霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/63
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/63;C12N15/66;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)底物結(jié)合蛋白重組質(zhì)粒，其特征在于，重組質(zhì)粒由胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)底物結(jié)合蛋白基因fliY序列和一段合適的載體片段連接而成，所述fliY序列如NCBI上Gene?ID為948833的序列所示，載體片段為pET28a。

2.如權(quán)利要求1所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述fliY序列分別置于T7啟動(dòng)子、Lac操縱子之下。

3.如權(quán)利要求1所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述fliY序列為來(lái)源于E.coli?K12的fliY基因。

4.如權(quán)利要求1或2所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒還包括一段抗性基因片段---卡那霉素抗性基因。

5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的重組質(zhì)粒的構(gòu)建方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A)PCR擴(kuò)增獲得fliY序列；

B)將fliY序列克隆到合適的表達(dá)載體。

6.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的重組質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)化合成谷胱甘肽的原始細(xì)菌株大腸桿菌E.coli?BL21(DE3)的應(yīng)用。

7.一種提高半胱氨酸利用率生物合成谷胱甘肽的方法，其特征在于，所述方法為，將權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化合成谷胱甘肽原始細(xì)菌株大腸桿菌E.coli?BL21(DE3)，獲得重組菌。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)所述重組菌，并在發(fā)酵培養(yǎng)一定時(shí)間后，用誘導(dǎo)劑乳糖誘導(dǎo)胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)底物結(jié)合蛋白基因fliY的表達(dá)，提高半胱氨酸利用率，進(jìn)一步提高谷胱甘肽的合成量。