[發(fā)明專利]一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法

有效

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• 申請日: 2014-03-24
• 公開（公告）號: CN103852432B
• 公開（公告）日: 2016-08-31
• 發(fā)明（設計）人: 梁曉聲;熊海容;王海英;郭小華;汪文俊
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/552
• 代理公司: 武漢華旭知識產(chǎn)權事務所 42214
• 代理人: 周宗貴;劉榮

技術領域

本發(fā)明涉及一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，屬于食品和日常用品安全檢測技術領域。

背景技術

雙酚A（Bisphenol?A，縮寫為BPA），一種有機化合物，具有兩個酚官能團。在工業(yè)上雙酚A被用來合成聚碳酸酯（PC）和環(huán)氧樹脂等材料，60年代以來就被用于制造塑料（奶）瓶、幼兒用的吸口杯、食品和飲料（奶粉）罐內側涂層。后來，人們發(fā)現(xiàn)BPA能導致內分泌失調，威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。2012年9月24日，美國華盛頓州立大學等機構刊登其研究，公布其在獼猴進行的實驗結果，證實雙酚A會影響獼猴雌性后代的生殖系統(tǒng)，導致卵子染色體異常（Hunt,Patricia?A.et.al.PNAS.2012,109(43)17525-17530）。雖然目前各國已先后禁止了雙酚A在嬰兒奶瓶中的應用，但是在日常成人飲水杯，熱敏紙，食品包裝材料等領域仍有著廣泛的應用。由于雙酚A的大量使用，環(huán)境中雙酚A也普遍存在，如自然水體，雨水等都能檢出不同濃度的雙酚A。

目前國內僅出臺了聚合物材料中雙酚A檢出的國家標準，國標采用高效液相色譜來實現(xiàn)雙酚A的檢出，檢出靈敏可靠，然而檢出前處理步驟麻煩，依賴大型儀器，檢測通量不高。對于雙酚A這樣普遍存在的環(huán)境污染物而言，快速高通量篩查技術可與高效液相色譜技術形成互補，實現(xiàn)大規(guī)模檢測和樣品篩查。快速檢測技術是檢測領域的一塊很有競爭力的方向，快速檢測技術具有檢測方法簡單易行，檢測時間短，不需要大型儀器，甚至無需依賴儀器。盡管快速檢測由于靈敏度和特異性方面的限制，不能作為判定樣品安全性的最終依據(jù)；但作為發(fā)現(xiàn)問題的第一步，它具有不可替代的作用。事實上，一些突發(fā)食源性事件的現(xiàn)場調查也往往以快速檢測作為篩查的第一步。目前雙酚A快速檢測技術還處于初步發(fā)展階段，比較常用的有抗體標記納米金試紙條法，利用納米金標記抗體識別雙酚A，抗體雙酚A復合物被捕獲后形成紅色條帶實現(xiàn)檢測。該方法只能提供有或無的結果，而且檢測使用抗體成本較高，無法真正用于大規(guī)模篩查。因此，開發(fā)一種具有定量能力、成本低廉且檢測通量高的雙酚A檢測方法十分必要。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，該方法能對雙酚A進行半定量和定量分析，成本低，且具有檢出通量高、檢測范圍廣、準確和速度快的優(yōu)點。

實現(xiàn)本發(fā)明目的所采用的技術方案為：

一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，將對巰基苯酚溶液加入到納米金溶液中，避光孵育至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠，以已知濃度的雙酚A溶液為標準品，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H₂O₂共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，檢測含不同已知濃度的雙酚A溶液的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數(shù)為橫坐標，根據(jù)檢測的數(shù)據(jù)繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據(jù)標準曲線得到標準曲線的函數(shù)關系式y(tǒng)=kx+b，以實際雙酚A樣品為被檢測物，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H₂O₂共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發(fā)生聚集，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數(shù)關系式的y值中，計算出x值，再根據(jù)x值計算出實際雙酚A樣品的濃度。

所述的對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，包括如下步驟：

1）對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備：

①按摩爾比對巰基苯酚﹕納米金=0.1﹕1～100﹕1，將濃度為1～20nM的納米金溶液加入對巰基苯酚溶液中至對巰基苯酚溶液的終濃度為0.1nM～2μM，混合均勻后，避光孵育至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠；

2）建立雙酚A的標準工作曲線：