[發明專利]一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法

有效

• 申請號: 201410111567.6
• 申請日: 2014-03-24
• 公開（公告）號: CN103852432B
• 公開（公告）日: 2016-08-31
• 發明（設計）人: 梁曉聲;熊海容;王海英;郭小華;汪文俊
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/552
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 周宗貴;劉榮

1.一種對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于：將對巰基苯酚溶液加入到納米金溶液中，避光反應至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠，以已知濃度的雙酚A溶液為標準品，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H₂O₂共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發生聚集，檢測含不同已知濃度的雙酚A溶液的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據檢測的數據繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系式y=kx+b，以實際雙酚A樣品為被檢測物，對巰基苯酚修飾納米金溶膠為檢測物，在過氧化物酶或過氧化物模擬酶，與H₂O₂共同存在的條件下，對巰基苯酚修飾納米金發生聚集，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的y值中，計算出x值，再根據x值計算出實際雙酚A樣品的濃度。

2.根據權利要求1所述的對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于包括如下步驟：

1）對巰基苯酚修飾納米金溶膠的制備：

①按摩爾比對巰基苯酚﹕納米金=0.1﹕1～100﹕1，將對巰基苯酚溶液加入濃度為1～20nM的納米金溶液中至對巰基苯酚溶液的終濃度為0.1nM～2μM，混合均勻后，避光反應至得到對巰基苯酚修飾納米金溶膠；

2）建立雙酚A的標準工作曲線：

①在酶標儀微孔板的7個以上的孔中分別加入7組以上的相同體積、不同已知濃度的標準雙酚A溶液，再分別加入催化量的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，過量的H₂O₂溶液和過量的對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為7個以上的實驗組，其中7個以上的實驗組中加入的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H₂O₂溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠完全相同，在另一個微孔板的一個孔中，加入與各實驗組中雙酚A溶液等體積的水，再加入與各實驗組相同的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H₂O₂溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠，作為陰性對照組，10～42℃孵育至各實驗組與陰性對照組相比有色差后，檢測各實驗組中含已知濃度的雙酚A的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在波長為520nm和720nm處的光密度；

②以720nm和520nm處光密度的比值為縱坐標，以2為底雙酚A濃度的對數為橫坐標，根據各實驗組檢測的數據繪圖，擬合后得到雙酚A的標準曲線，根據標準曲線得到標準曲線的函數關系式y=kx+b；

3）實際雙酚A樣品濃度的測定：

①在酶標儀微孔板的一個孔中先加入與步驟2）中各實驗組中雙酚A溶液等體積的實際雙酚A樣品，再加入與步驟2）中各實驗組相同的過氧化物酶溶液或過氧化物模擬酶溶液，H₂O₂溶液和對巰基苯酚修飾納米金溶膠，10～42℃孵育至出現色差后，檢測含實際雙酚A樣品的對巰基苯酚修飾納米金溶膠在720nm和520nm處的光密度，將720nm和520nm處光密度的比值代入標準曲線的函數關系式的y值中，計算出x值，再根據x值計算出實際雙酚A樣品的濃度。

3.根據權利要求2所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于：

所述納米金溶液中納米金的粒徑為5-50nm。

4.根據權利要求2所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于：

所述過氧化物酶為辣根過氧化物酶，過氧化物模擬酶為氯化血紅素。

5.根據權利要求5所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于：

所述辣根過氧化物酶或過氧化物模擬酶的終濃度為0.2nM-2μM。

6.根據權利要求2所述對巰基苯酚修飾納米金檢測雙酚A的方法，其特征在于：

所述H2O2溶液的終濃度為0.00006%-0.6%，該濃度為體積百分比濃度。