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[發(fā)明專利]一種綠風藤茶品種復壯的快速繁殖方法有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 201410110182.8 申請日: 2014-03-24
公開(公告)號: CN103891613A 公開(公告)日: 2014-07-02
發(fā)明(設計)人: 武蕓;鄭小江;張澤;武玉蓮;卜貴軍;曾智;楊婷;方響亮 申請(專利權(quán))人: 湖北民族學院
主分類號: A01H4/00 分類號: A01H4/00
代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001 代理人: 王敏鋒
地址: 445000 湖北省*** 國省代碼: 湖北;42
權(quán)利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 綠風藤茶 品種 復壯 快速 繁殖 方法
【說明書】:

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明屬于植物莖尖脫毒以達到品種復壯的組培快繁技術(shù)領(lǐng)域,更具體涉及一種綠風藤茶品種復壯的組培快速繁殖方法。

背景技術(shù)

藤茶為葡萄科(Vitaceae)蛇葡萄屬(Ampe?|?opsis?Michaux)藥食兩用的木質(zhì)藤本植物顯齒蛇葡萄(A.grossedentata(Hand.-Mazz.)W.T.Wang),富含黃酮(二氫楊梅素)、氨基酸、多糖、多酚、維生素等多種有效成分。現(xiàn)代藥理學與生物活性研究表明,藤茶具有抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、降血糖、降血脂等多種生物活性。綠鳳藤茶(A.grossedentata?CV,lufeng,)是鄭小江等經(jīng)過多年選育的無性系,2003年12月通過湖北省恩施州農(nóng)作物品種審(認)定小組審(認)定和湖北省農(nóng)作物品種審定委員會備案為推廣品種,所含多糖、總氨基酸、維生素等都極顯著高于顯齒蛇葡萄,是大量應用于醫(yī)藥、保健、功能性飲食品工業(yè)的優(yōu)質(zhì)原料。目前,恩施州綠鳳藤茶的種植面積已達8000余畝,并產(chǎn)生了較好的經(jīng)濟效益。近年來,由于藤茶種植時間較長且種苗均采用扦插的方式得到,其品種退化較為嚴重,使藤茶的產(chǎn)量及品質(zhì)均有所下降。

感染病毒植株的體內(nèi)病毒的分布并不均勻,病毒的數(shù)量隨植株部位及年齡而異,越靠近莖頂端區(qū)域的病毒的感染深度越低,生長點(約0.1~1.0mm區(qū)域)則幾乎不含或含病毒很少。這是因為分生區(qū)域內(nèi)無維管束,病毒只能通過胞間連絲傳遞,趕不上細胞不斷分裂和活躍的生長速度。在切取莖尖時越小越好,但太小則不易成活,過大則不能保證完全除去病毒。莖尖培養(yǎng)脫毒,由于其脫毒效果好,后代穩(wěn)定,所以是目前培育無病毒苗的最廣泛最重要的一個途徑。

通過綠風藤茶莖尖的組織培養(yǎng)得到了一種綠風藤茶品種復壯的組培快繁技術(shù),并確定了進行組織培養(yǎng)的幾個培養(yǎng)基的最佳方案。通過大量繁殖,其成活率達85%以上,且性狀穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是在于提供了一種綠風藤茶品種復壯的組培快速繁殖方法,方法易行,操作簡便,有效地防止了外植體接種污染率,接種成功率達85%以上;提出的綠風藤茶品種復壯的優(yōu)化培養(yǎng)基針對性強、適用性好,組培苗、叢生芽及芽增值系數(shù)高,生根整齊,苗壯,成活率高,適用于綠風藤茶苗的商業(yè)生產(chǎn)。

為了實現(xiàn)上述的目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)措施:

一種綠風藤茶品種復壯的組培快速繁殖方法,其步驟是:

A)?外植體的選取與滅菌:取健壯的綠風藤茶幼嫩枝條的莖尖,經(jīng)表面滅菌后備用。外植體的選取與滅菌為當年新萌發(fā)嫩枝的莖尖,剪掉嫩枝的葉片和卷須,切成長0.4-0.6cm帶頂芽莖段,用洗潔精浸泡5~10?min后,用毛筆輕輕地刷洗干凈,流水沖洗2-4h,移至超凈工作臺上,用70%(體積比)的酒精震蕩清洗28-32S,無菌水洗2-4次,再放入質(zhì)量(g)與體積(mL)之比為0.1%的升汞溶液中震蕩消毒6-8min,無菌水沖洗4-6次后,在解剖鏡下切下0.4-0.6mm的莖尖,接種到初代培養(yǎng)基上;所述的洗潔精為普通的立白洗潔精(家里洗菜洗碗用的洗潔精均可)。

B)將滅菌后的綠風藤茶幼嫩枝條的莖尖進行初代培養(yǎng):在無菌條件下將經(jīng)表面滅菌后的外植體接種在初代培養(yǎng)基中,培養(yǎng)15~20d后,轉(zhuǎn)接到誘導分化叢芽的培養(yǎng)基中;所述的初代培養(yǎng)基:WPM+6-BA1.5mg.L-1+NAA0.2mg.L-1+PVP2g.L-1?+25g.L-1蔗糖;或?MS+6-BA1.5?mg.L-1+NAA0.2?mg.L-1+?PVP2g.L-1+25g.L-1蔗糖;

C)增殖培養(yǎng):在無菌條件下將叢芽切成單株接入增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)30~45天叢生芽可增殖出5~8倍;根據(jù)對幼苗數(shù)量的需求,每隔30~45d按同樣方法進行幼苗再增殖培養(yǎng);誘導叢生芽和芽增殖的培養(yǎng)基:MS+TDZ0.2mg.L-1+IAA0.1mg.L-1+25g.L-1蔗糖;或WPM+6-BA1.5mg.L-1+NAA0.2mg.L-1+25g.L-1蔗糖;

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