[發明專利]人血液中血型抗體聯合快速檢測體系

有效

• 申請號: 201410109995.5
• 申請日: 2014-03-24
• 公開（公告）號: CN103926415A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 楊啟修;朱自嚴;楊穎;韓莎莎;張嘉敏;朱傲雪
• 申請（專利權）人: 上海市血液中心
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

【技術領域】

本發明涉及血型抗體的檢測技術，具體地說，涉及一種人血液中血型抗體聯合快速檢測體系。

【背景技術】

人體若有過輸血、移植或妊娠經歷，會有一定的幾率產生針對血液中的紅細胞、血小板、淋巴細胞與中性粒細胞等細胞血型抗原成分的抗體，稱之為血型抗體。一旦機體產生了抗體之后，在之后的輸血、移植或妊娠過程中，都有可能導致由血型抗體引起的免疫反應的發生。

針對血細胞的抗體在臨床疾病的診斷中具有重要意義。例如，紅細胞抗體會引起溶血性輸血反應、免疫性溶血性貧血，血小板抗體可能會導致免疫性血小板輸注無效，以及白細胞抗體可能會造成輸血性相關急性肺損傷（TRALI）的發生。同樣，在其他一些免疫性疾病中，例如免疫性溶血性貧血、免疫性血小板減少癥或血小板減少性紫癜、免疫性粒細胞減少癥以及一些免疫性新生兒溶血病等，也都是由相對應的血細胞抗體引起的。

因此，建立一種檢測血液中針對血細胞抗體的檢測體系，無論是對于臨床血液安全輸注還是疾病的診斷，都具有十分重要的意義。

現有的針對各種抗體的檢測方法有：

(1)紅細胞抗體檢測方法：A．試管凝集法：通過紅細胞懸液與血清在試管中反應，觀察是否出現凝集來判定血清中是否有抗體的存在。B．柱凝集法：通過紅細胞懸液與血清在凝膠卡反應池中反應后離心，根據紅細胞在凝膠柱中分布位置來判定是否有抗體的存在。C．固相化法：將血清在固定有紅細胞抗原組分的固相化表面上反應，然后通過化學發光、熒光素發光或是顆粒指示物等方法來判定是否有抗體的尋在。D．流式細胞術：紅細胞與血清反應之后，使用熒光素標記的抗抗體與反應后的細胞結合，再使用流式細胞儀來判定是否有抗體存在于血清之中。

(2)血小板抗體檢測方法：A．固相化法：目前應用于血小板抗體檢測的固相化法包括簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗(SEPSA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、血小板單克隆特異性抗體固定試驗(MAIPA)、抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗(MACE)以及單克隆抗體固相血小板抗體試驗(MASPAT)等，這些方法都是基于固相化技術，使用直接或間接的方法將血小板抗原固定于固相表面，與血清反應后，使用顯色或是顆粒指示物對結果進行分析，判斷血清中是否含有抗體。B．流式細胞術：使用熒光素結合的抗抗體標記與血清反應之后的血小板，再使用流式細胞儀來判定是否有抗體存在于血清之中。

(3)白細胞(淋巴細胞與中性粒細胞)抗體檢測方法：A．微量淋巴細胞毒試驗：是一種借助補體的生物學作用介導細胞裂解的細胞毒試驗。含有HLA抗體的血清與淋巴細胞表面的相應抗原結合后激活補體，導致細胞膜損傷，通透性增強，染料進入細胞，細胞死亡。在倒置相差顯微鏡下觀察，著色的細胞為死亡細胞，視野下有較多細胞死亡則為陽性。B．流式細胞術：待檢血清與固定表達白細胞抗原的細胞系或是商業化包被有白細胞抗原的顆粒物反應之后，使用熒光素標記的抗抗體與反應后的細胞結合，再使用流式細胞儀來判定是否有抗體存在于血清之中。

????但是上述方法存在操作繁瑣或靈敏度差等缺陷，不能對各種血細胞的抗體進行同步的大批量的檢測。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種血型抗體聯合快速檢測體系。

本發明的再一的目的是，提供上述血型抗體聯合快速檢測體系的制備方法。

本發明的另一的目的是，提供上述血型抗體聯合快速檢測體系的用途。

本發明的第四個目的是，提供一種檢測血型抗體的方法。

本發明的第五個目的是，提供一種檢測血型抗體的試劑盒。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種血型抗體聯合快速檢測體系，它是由以下方法制備的：配制血細胞懸液，加入U型孔中，靜置15-30min，100-200×g離心2-3min，棄上清，用緩沖液洗滌后低溫干燥48-72小時。

所述的血細胞懸液選自：

a）生理鹽水配制的(3-5)×10⁷/ml的紅細胞懸液；

b）緩沖液配制的(5-10)×10⁷/ml的血小板懸液；

c）緩沖液配制的(0.5-2)×10⁷/ml的淋巴細胞懸液；或

d）緩沖液配制的(0.5-2)×10⁷/ml的中性粒細胞懸液。

優選地，所述的制備方法是：配制血細胞懸液，加入U型孔中，靜置20min，150×g離心2.5min，棄上清，用緩沖液洗滌后低溫干燥60小時。