[發(fā)明專利]糖基化抗體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410108197.0
• 申請(qǐng)日: 2007-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN103864923A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S·漢森;K-P·金克勒;D·羅伊施;R·舒馬赫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/00
• 分類號(hào): C07K16/00;A61K39/395;A61P37/06;A61P37/02;A61P31/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 史文靜;黃革生

本申請(qǐng)為2007年4月10日提交的、發(fā)明名稱為“糖基化抗體”的PCT申請(qǐng)PCT/EP2007/003164的分案申請(qǐng)，所述PCT申請(qǐng)進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段的日期為2008年10月8日，申請(qǐng)?zhí)枮?00780012678.X。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及其Fc區(qū)得以表達(dá)且被糖基化的重組抗體，由此與抗體Fc區(qū)相連的主要核心糖結(jié)構(gòu)被充分巖藻糖基化(fucosylated)。本發(fā)明還涉及CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢)宿主細(xì)胞，選擇此類CHO宿主細(xì)胞的方法，以及此類重組抗體的用途。

發(fā)明背景

天然形式的免疫球蛋白或抗體通常是由兩條輕鏈和兩條重鏈組成的四聚體糖蛋白。抗體含有恒定結(jié)構(gòu)域，據(jù)此將抗體歸屬為不同的類，如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，以及若干亞類，如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgG1和IgG3類的人抗體通常介導(dǎo)ADCC(抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用)。

也存在已知的其他抗體樣分子，含有例如異源蛋白質(zhì)如受體、配體或酶的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，和抗體的Fc區(qū)。例如，這樣的Fc融合蛋白由Stabila，P.等，Nature?Biotech16(1998)1357-1360和US5,610,297描述。

單克隆抗體引發(fā)四種效應(yīng)功能：ADCC，吞噬作用，補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒作用(CDC)，影響半衰期/清除率。ADCC和吞噬作用通過細(xì)胞結(jié)合的抗體與FcγR(Fcγ受體)之間的相互作用介導(dǎo)；CDC則通過細(xì)胞結(jié)合的抗體與構(gòu)成補(bǔ)體系統(tǒng)的系列蛋白之間的相互作用。CDC與C1q結(jié)合C3激活和/或Fc受體與Fc部分的結(jié)合相關(guān)。如果需要降低C1q結(jié)合C3激活和/或Fc受體與抗體恒定部分的結(jié)合，通常使用IgG4抗體，它不激活補(bǔ)體系統(tǒng)，不結(jié)合C1q，不激活C3。可選地，使用含有γ1重鏈恒定區(qū)的Fc部分，其中所述恒定區(qū)具有某些突變，如L234A和L235A或D265A和N297A(WO99/51642)。

本領(lǐng)域眾所周知如何修飾抗體的恒定結(jié)構(gòu)域以改善效應(yīng)功能。例如，這樣的方法描述在WO99/54342中。

Routier，F(xiàn).H.等，Glycoconjugate?J.14(1997)201-207報(bào)道了在CHO-DUKX細(xì)胞中表達(dá)的人源化IgG1抗體的糖基化模式。此抗體顯示出Fuc∶Man為0.8∶3.0的摩爾比，述及80％的巖藻糖基化比率。Niwa，R.等，J.Immunol.Methods306(2005)151-160報(bào)道了在CHO?DG44中重組生產(chǎn)的巖藻糖基化約為90％的抗CD20IgG1和IgG3抗體。Mimura，Y等，J.Immunol.Methods247(2001)205-216報(bào)道了丁酸鹽增加CHO-K1細(xì)胞中人嵌合IgG的產(chǎn)量，同時(shí)維持其功能和糖型分布。寡糖分布顯示相當(dāng)可觀量的無巖藻糖基化的(afucosylated)聚糖結(jié)構(gòu)。Raju，T.S.，BioProcess?International1(2003)44-53報(bào)道了表達(dá)系統(tǒng)糖基化差異對(duì)治療性免疫球蛋白生物活性的影響以及命名法。Ma，S.，Anal.Chem.71(1999)5185-5192報(bào)道了利妥昔單抗(rituximab)的糖分析。利妥昔單抗顯示出9-10％的巖藻糖基化(Niwa，R.等，J.Immunol.Methods306(2005)151-160)。Fujii，S.，J.Biol.Chem.265(1990)6009-6018報(bào)道牛IgG包括大約11％無巖藻糖基化的IgG。Mizouchi，T.，J.Immunol.129(1982)2016-2020報(bào)道人IgG大約14％是無巖藻糖基化的。Bergwerff，A.A.，Glycoconjugate?J.12(1995)318-330報(bào)道了在小鼠SP2/0中生產(chǎn)的抗體含有大量N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(N-glycolylneuraminic?acid，NGNA)寡糖。Nahrgang，S.等在Animal?Cell?Technology：Products?from?Cells，Cells?as?Products，Bernard，A.等(編輯)，Kluwer?Academic?Publishers，Dordrecht，NL，1999，第259-261頁(yè)中報(bào)道了IgG1的CHO表達(dá)，在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染之后發(fā)現(xiàn)總體糖基化弱。Lund，J.等，Mol.Immunol.30(1993)741-748報(bào)道了在小鼠轉(zhuǎn)染瘤細(xì)胞中重組生產(chǎn)小鼠-人嵌合抗體。13％量的IgG1抗體是無巖藻糖基化的。Patel，T.P.等，Biochem.J.285(1992)839-845報(bào)道了來自雜交瘤細(xì)胞和小鼠腹水的抗體的糖基化。Niwa，R.等，J.Immunol.Methods306(2005)151-160報(bào)道了在CHO?DG44中重組生產(chǎn)CD20IgG1抗體之后91％的巖藻糖基化，而Mori，K.等，Biotech.Bioeng.88(2004)901-908報(bào)道了94％的巖藻糖基化。Davies，J.等，Biotechnol.Bioeng.74(2001)288-294報(bào)道表達(dá)具有改變的糖型的抗體導(dǎo)致ADCC增加。Sheeley，D.M.等，Anal.Biochem.247(1997)102-110比較了不同表達(dá)系統(tǒng)中的抗體糖基化。Shields，R.L.等，J.Biol.Chem.277(2002)26733-26740報(bào)道人IgG1Fc上缺乏巖藻糖提高FcγRIII結(jié)合和ADCC。Zhu，L.等，Nature?Biotechnol.23(2005)1159-1169報(bào)道了在雞蛋中生產(chǎn)人抗體。WO2004/087756和WO2005/005635公開了抗IGF-1R的改良的抗體。