[發(fā)明專利]對(duì)植物具有多種功能的海洋芽孢桿菌及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410106725.9
• 申請(qǐng)日: 2014-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN104928200B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田黎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/07
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋微生物領(lǐng)域，具體的說是由海洋生境獲得的芽孢桿菌，種名：海洋芽孢桿菌(Bacillus marinus)，通過人工誘變育種及培養(yǎng)發(fā)酵，活菌制劑對(duì)栽培植物具有防病、促生長(zhǎng)、誘導(dǎo)抗寒抗鹽的作用。該菌種保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期2012年6月5日，保藏編號(hào)CGMCC No.6187，分類命名Bacillus marinus。

背景技術(shù)

農(nóng)產(chǎn)品安全是所有食品安全的的源頭，研發(fā)和使用高效低毒的生物農(nóng)藥是保證農(nóng)產(chǎn)品安全的基本措施，活菌制劑是生物農(nóng)藥的一大種類，這些有益菌通過定殖在植物體或寄生在害蟲體內(nèi)，發(fā)揮抑菌和殺蟲等作用。芽孢桿菌是其中最著名的益生菌，作為各種酶的產(chǎn)生菌廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)；作為飼料添加劑和醫(yī)藥，可抑制常見腸道病原菌，提高動(dòng)物抗病能力，降低抗生素用量；其無毒、成本低、殺蟲、抑菌能力強(qiáng)的特點(diǎn)，也為國內(nèi)外研發(fā)生物農(nóng)藥所關(guān)注，是世界產(chǎn)量最大的生物農(nóng)藥，新資源、新用途的發(fā)現(xiàn)更是國內(nèi)外農(nóng)藥領(lǐng)域爭(zhēng)奪的對(duì)象。

我國是土壤鹽漬化嚴(yán)重的國家之一，鹽漬化土壤總面積達(dá)3460萬公頃，相當(dāng)于耕地的1／3，鑒于人多地少的特點(diǎn)，這些鹽漬化土壤仍被人們所利用栽種耐鹽作物，同時(shí)，早春和晚秋的倒春寒每年也造成農(nóng)作物巨大損失。目前國內(nèi)外開發(fā)微生物農(nóng)藥由于生防菌都來源于陸地，在含鹽量較高的土壤中難以存活、定殖，在鹽漬地土傳病害的防治效果較差；陸地生防菌由于生境原因，較低的環(huán)境溫度限制了其發(fā)揮作用。近幾年受到國內(nèi)外關(guān)注的新資源-海洋微生物，由于其原始生境的低溫高鹽特性，使其更易在鹽漬土壤和低溫環(huán)境發(fā)揮作用，在新農(nóng)藥開發(fā)領(lǐng)域顯現(xiàn)其生境優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一株在防治植物病害的同時(shí)又可誘導(dǎo)植物抗鹽，促進(jìn)植物生長(zhǎng)的海洋芽孢桿菌，及在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用。發(fā)明充分利用了海洋微生物這一特殊生境的天然資源，野生菌株已通過人工誘變育種，生物學(xué)特性和農(nóng)藥活性穩(wěn)定，容易培養(yǎng)，培養(yǎng)周期短，操作方法簡(jiǎn)便可行，對(duì)環(huán)境沒有污染，所用原料廉價(jià)，生產(chǎn)成本低，開發(fā)前景好，容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，由海洋生境獲得了海洋芽孢桿菌BY-1188菌株(Bacillus marinus)，經(jīng)人工誘變育種和培養(yǎng)條件優(yōu)化，其適宜的人工培養(yǎng)發(fā)酵的條件為：

1)以其保藏編號(hào)為：CGMCC No.6187的BY-1188菌株，菌株經(jīng)培養(yǎng)基優(yōu)化測(cè)試，其適宜的發(fā)酵培養(yǎng)液的配方為：蛋白胨2-5g，酵母粉1-3g，NaCl，25-30g，KCl0.3-0.5g，MgCl₂·7H₂O1.9-2.5g，F(xiàn)ePO₄0.01-0.02g，水1000ml，pH7.0-7.5，上述為培養(yǎng)液，加瓊脂16-19g為固體培養(yǎng)基；

2)菌株在上述固體培養(yǎng)基置22℃-27℃溫箱培養(yǎng)2-3天，將固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)好的菌體刮下，接入步驟1中的培養(yǎng)液培養(yǎng)3天為種子液，再將種子液接入40-50L上述培養(yǎng)液中，22℃-27℃轉(zhuǎn)速150rpm，振蕩培養(yǎng)3-5天，獲得發(fā)酵液，并可逐級(jí)放大。

所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株菌落表面粗糙不透明，前期灰白色，后轉(zhuǎn)變?yōu)闈峒t色，邊緣缺刻狀，表面多褶；菌體呈直桿狀，革蘭氏染色陽性，0.5-2.5μm×1.2-10μm，無莢膜，周生鞭毛，芽孢中生不膨大，成對(duì)或鏈狀排列；生理生化特征：BY-1188菌株能在5％NaCl的環(huán)境生長(zhǎng)，明膠酶試驗(yàn)陽性，觸酶反應(yīng)陽性，接觸酶試驗(yàn)陽性，淀粉水解試驗(yàn)陰性，VP試驗(yàn)陰性，吲哚反應(yīng)、H₂S反應(yīng)陰性，氧化葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不利用檸檬酸鹽，不能水解尿素和卵磷脂。

所述的海洋芽孢桿菌BY-1188菌株采用對(duì)峙培養(yǎng)法、96孔板法、抑菌率統(tǒng)計(jì)法3種抑菌測(cè)試聯(lián)合測(cè)試方法選出，菌株實(shí)用性強(qiáng)：