[發(fā)明專利]一種同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410105963.8
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103837620A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐立旭
• 申請（專利權(quán)）人: 上海碩源健標(biāo)生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)分析檢測領(lǐng)域，尤其是一種操作簡單、檢測成本低、具有高度準(zhǔn)確性和高度靈敏的檢測方法，具體涉及一種同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法。

背景技術(shù)

氨基酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)并同生命活動有關(guān)的最基本的物質(zhì)，是在生物體內(nèi)構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位，與生物的生命活動有著密切的關(guān)系。它在抗體內(nèi)具有特殊的生理功能，是生物體內(nèi)不可缺少的營養(yǎng)成分之一。構(gòu)成人體的最基本的物質(zhì)，有蛋白質(zhì)、脂類、碳水化合物、無機鹽、維生素、水和食物纖維等。作為構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位的氨基酸，無疑是構(gòu)成人體最基本物質(zhì)之一。

蛋白質(zhì)在機體內(nèi)的消化和吸收式通過氨基酸來完成的：作為機體內(nèi)第一營養(yǎng)要素的蛋白質(zhì)，它在食物營養(yǎng)中的作用是顯而易見的，它在人體內(nèi)并不能直接被利用，而是通過變成氨基酸小分子被利用。

生命的產(chǎn)生、存在和消亡，無一不與蛋白質(zhì)有關(guān)，正如恩格斯所說：“蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，生命是蛋白質(zhì)存在的一種形式。”如果人體內(nèi)缺少蛋白質(zhì)，輕者體質(zhì)下降，發(fā)育遲緩，抵抗力減弱，貧血乏力，重者形成水腫，甚至危及生命。一旦失去了蛋白質(zhì)，生命也就不復(fù)存在，故有人稱蛋白質(zhì)為“生命的載體”。可以說，它是生命的第一要素。

蛋白質(zhì)的基本單位是氨基酸。如果人體缺乏任何一種必需氨基酸，就可導(dǎo)致生理功能異常，影響機體代謝的正常進行，最后導(dǎo)致疾病。同樣，如果人體內(nèi)缺乏某些非必需氨基酸，會產(chǎn)生機體代謝障礙。精氨酸和瓜氨酸對形成尿素十分重要；胱氨酸攝入不足就會引起胰島素減少，血糖升高。又如創(chuàng)傷后胱氨酸和精氨酸的需要量大增，如缺乏，即使熱能充足仍不能順利合成蛋白質(zhì)。總之，氨基酸在人體內(nèi)通過代謝可以發(fā)揮下列一些作用：①合成組織蛋白質(zhì)；②變成酸、激素、抗體、肌酸等含氨物質(zhì)；③轉(zhuǎn)變?yōu)樘妓衔锖椭荆虎苎趸啥趸己退澳蛩兀a(chǎn)生能量。因此，氨基酸在人體中的存在，不僅提供了合成蛋白質(zhì)的重要原料，而且對于促進生長，進行正常代謝、維持生命提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。如果人體缺乏或減少其中某一種，人體的正常生命代謝就會受到障礙，甚至導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生或生命活動終止。由此可見，氨基酸在人體生命活動中顯得多么需要。

目前國內(nèi)外使用的檢測方法有電化學(xué)法、分光光度法、高效液相色譜法、毛細管電泳法及氣相色譜法等。高效液相色譜法是目前使用最為普遍的方法，而高效液相色譜法中的離子交換法和反相色譜法又是應(yīng)用最廣泛的兩種。但目前的方法大多比較操作復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，該檢測方法操作簡單，可同時檢測人體血漿中可能出現(xiàn)的24種氨基酸中的任意一種或幾種或全部，具有高準(zhǔn)確度和高靈敏度。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，所述多種氨基酸分別為：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、瓜氨酸、牛磺酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、氯化銨、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、鳥氨酸以及賴氨酸中的一種或幾種或全部；所述方法包括以下步驟：①采取人體血漿，并將血漿用甲醇進行脫蛋白，得到含有多種氨基酸的上清液；②將所得到的含有多種氨基酸的上清液與衍生化試劑進行衍生化反應(yīng)，生成有紫外吸收的衍生化產(chǎn)物；③對衍生化產(chǎn)物采用高效液相法進行分析。

進一步地，步驟①中脫蛋白的具體過程為：取人體血漿樣品置于離心管中，加入甲醇，震蕩混勻，再用12000r/m的轉(zhuǎn)速離心5min，并取上清液置于干凈的離心管中，該上清液即為步驟①所述的含有多種氨基酸的上清液。

進一步地，步驟②中衍生化反應(yīng)的具體過程為：向所述的含有多種氨基酸的上清液中加入三乙胺溶液、異硫氰酸苯酯溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，均勻混合，室溫下衍生1h，加入正己烷，漩渦混勻，靜置10min，取下層溶液過0.2μm的濾膜，進樣分析，以色譜峰面積內(nèi)標(biāo)法定量。

進一步地，所述三乙胺溶液為三乙胺乙腈溶液，所述異硫氰酸苯酯溶液為異硫氰酸苯酯乙腈溶液，所述內(nèi)標(biāo)溶液為用0.1mol/L鹽酸將內(nèi)標(biāo)物溶解并稀釋為50μmol/L的內(nèi)標(biāo)溶液。

進一步地，所述內(nèi)標(biāo)物為正亮氨酸(Nle)。

進一步地，所述人體血漿樣品與所加甲醇的體積比為：1∶3。

進一步地，所述含有多種氨基酸的上清液、三乙胺乙腈溶液、異硫氰酸苯酯乙腈溶液以及內(nèi)標(biāo)溶液的體積比為：2∶1∶1∶1。