[發明專利]一種同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法

無效

• 申請號: 201410105963.8
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103837620A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 徐立旭
• 申請（專利權）人: 上海碩源健標生物醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述多種氨基酸分別為：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、瓜氨酸、牛磺酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、氯化銨、酪氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、鳥氨酸以及賴氨酸中的一種或幾種；所述方法包括以下步驟：

①采取人體血漿，并將血漿用甲醇進行脫蛋白，得到含有多種氨基酸的上清液；

②將所得到的含有多種氨基酸的上清液與衍生化試劑進行衍生化反應，生成有紫外吸收的衍生化產物；

③對衍生化產物采用高效液相法進行分析。

2.根據權利要求1所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：步驟①中脫蛋白的具體過程為：取人體血漿樣品置于離心管中，加入甲醇，震蕩混勻，再用12000r/m的轉速離心5min，并取上清液置于干凈的離心管中，該上清液即為步驟①所述的含有多種氨基酸的上清液。

3.根據權利要求1或2所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：步驟②中衍生化反應的具體過程為：向所述的含有多種氨基酸的上清液中加入三乙胺溶液、異硫氰酸苯酯溶液和內標溶液，均勻混合，室溫下衍生1h，加入正己烷，漩渦混勻，靜置10min，取下層溶液過0.2μm的濾膜，進樣分析，以色譜峰面積內標法定量。

4.根據權利要求3所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述三乙胺溶液為三乙胺乙腈溶液，所述異硫氰酸苯酯溶液為異硫氰酸苯酯乙腈溶液，所述內標溶液為用0.1mol/L鹽酸將內標物溶解并稀釋為50μmol/L的內標溶液。

5.根據權利要求4所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述內標物為正亮氨酸。

6.根據權利要求2所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述人體血漿樣品與所加甲醇的體積比為：1∶3。

7.根據權利要求4所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述含有多種氨基酸的上清液、三乙胺乙腈溶液、異硫氰酸苯酯乙腈溶液以及內標溶液的體積比為：2∶1∶1∶1。

8.根據權利要求1所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：在用高效液相法進行分析中，所用流動相包括流動相A和流動相B；流速0.8mL/min；檢測波長：254nm。

9.根據權利要求8所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述流動相A為0.05％醋酸鈉溶液，所述醋酸鈉溶液是在醋酸鈉中加水，并用冰醋酸調PH至6.35，搖勻后用0.45μm的濾膜過濾，超聲脫氣10min-15min。

10.根據權利要求8所述的同時檢測人體血漿中多種氨基酸含量的方法，其特征在于：所述流動相B為分析純的乙腈。