[發明專利]一種雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法

在審

• 申請號: 201410104323.5
• 申請日: 2014-03-20
• 公開（公告）號: CN103865972A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 王強;劉紅芝;李寧;劉麗;胡暉;石愛民;段玉權
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農產品加工研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

技術領域

本發明涉及花生粕利用領域，尤其涉及一種雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法。

背景技術

花生是我國重要的油料作物，產量和出口量高居世界首位。花生蛋白含有人體必需的八種氨基酸，精氨酸含量高于其它堅果，生物學效價高于大豆。

花生粕是花生榨油過程中產生的副產物，年產量約達300萬噸，根據提油工藝的不同，花生粕又分為熱榨花生粕、溶劑浸提花生粕和冷榨花生粕。目前，我國花生榨油主要采用熱榨的方式，熱榨花生粕中花生蛋白含量為45％～55％，但是熱榨花生粕中花生蛋白變性程度嚴重，影響其功能及生理活性，從中直接提取花生蛋白得率非常低，所以目前對熱榨花生粕的利用受到了很大的限制，僅有不足1％用于食品工業，大多用作動物飼料，產品附加值低，資源浪費嚴重，進一步開發和利用這一巨大的潛在蛋白資源，生產高附加值產品成了當務之急。

多項研究表明，花生蛋白經蛋白酶水解制備成花生肽后具有多種生理活性，包括抗氧化作用、抗菌作用、降血壓作用等。因此，研究熱榨花生粕酶解工藝制備花生肽，可以開發和利用熱榨花生粕這一巨大的潛在蛋白資源，生產高附加值蛋白產品。采用生物酶法在溫和條件下對蛋白進行水解，生成的多肽具有很高營養價值。現代營養研究表明，分子量小于1000U的短肽極易被人體吸收利用，而且具有較強的功能活性，這就要求所選用的酶解工藝在保證短肽得率的前提下盡量提高蛋白的水解度。

目前，關于花生肽的提取方法中普遍使用了大量堿處理或者一些有害的化學溶劑，不可避免地存在威脅人體健康的隱患。現有的生物酶處理方法中，普遍采用堿性蛋白酶對花生蛋白進行酶解，然后經過脫鹽等多個繁瑣的步驟，制備花生肽，酶解時間一般較長，普遍為360～960min，短肽得率及水解度較低，短肽得率在60％～65％左右，水解度在12％～16％左右，因此，如何簡化工藝并在短時間獲得高水解度、高得率的花生肽成為生產工藝中需要解決的一大難題。

發明內容

本發明的目的是提供一種雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法，通過利用中性蛋白酶和由內切酶與外切酶組成的復合蛋白酶分步酶解熱榨花生粕，并通過多項實驗確定最佳酶解條件及所述中性蛋白酶和復合蛋白酶的加入量，提供了一種工藝簡單、條件溫和、制備時間短、制備成本低且短肽得率及水解度高的花生肽的制備方法，有效提高熱榨花生粕的利用率。

本發明的技術方案為：

一種雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、將熱榨花生粕與蒸餾水混合，制備質量濃度為13～15％的熱榨花生粕溶液，并測定所述熱榨花生粕中花生蛋白的含量；

步驟二、調節并保持所述熱榨花生粕溶液的溫度為40～50℃，向所述熱榨花生粕溶液中加入中性蛋白酶，進行酶解反應1.5～2.0h，得到第一酶解液，其中所述中性蛋白酶的加入量根據所述熱榨花生粕溶液的質量濃度及所測定的熱榨花生粕中花生蛋白的含量計算得到；

步驟三、向所述第一酶解液中加入復合蛋白酶，保持溫度40～50℃，進行酶解反應2.0～3.0h，得到第二酶解液，其中所述復合蛋白酶的加入量根據所述熱榨花生粕溶液的質量濃度及所測定的熱榨花生粕中花生蛋白的含量計算得到；

步驟四、將所述第二酶解液中的所述中性蛋白酶和復合蛋白酶滅活，離心取上清液，得到花生肽溶液。

優選的是，所述的雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法中，步驟二中所述中性蛋白酶的酶解反應時間為1.5h，溫度為45℃。

優選的是，所述的雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法中，步驟三中所述復合蛋白酶的酶解反應時間為2.5h，溫度為45℃。

優選的是，所述的雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法中，步驟二中所述中性蛋白酶的加入量為5200～6500U／g花生蛋白，步驟三中所述復合蛋白酶的加入量為249～499U／g花生蛋白。

優選的是，所述的雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法中，步驟二中所述中性蛋白酶的加入量為5200U／g花生蛋白，步驟三中所述復合蛋白酶的加入量為374U／g花生蛋白。

優選的是，所述的雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法中，所述熱榨花生粕中花生蛋白的含量通過凱氏定氮法測定。

優選的是，所述的雙中性蛋白酶分步酶解熱榨花生粕制備花生肽的方法中，步驟一中所述熱榨花生粕溶液的質量濃度為14％。