[發明專利]一種基因組DNA提取方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201410103466.4
• 申請日: 2014-03-19
• 公開（公告）號: CN103911366A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 潘力;周斌;王斌;何攀;呂揚勇;廖瑜玲;李秀鵬
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

1.一種基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，包括溶液A、溶液B、溶液C、溶液D和純化柱；

溶液A：10mM-50mM?Tris-HCl，10mM-50mM?EDTA，1%-10%w/v?SDS，2M-4M?NaCl，0.5%-2%v/vβ-巰基乙醇，pH7.5-8.5；

溶液B：2.5-6M的鹽酸胍或異硫氰酸胍，20%-50%v/v異丙醇或是無水乙醇，5mM-20mM?EDTA，pH4.5-6.5；

溶液C：70%-80%v/v的無水乙醇，pH4.5-6.5；

溶液D：5-50μg/mL的RNA酶水溶液，用1M?NaOH溶液調pH至7.0-8.5。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括研磨器，該研磨器可以為電動組織研磨器或者小型的手提電鉆其轉速800-12000rpm，配有長度為40-80mm，直徑3-7mm的錐形研磨杵。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述研磨器的轉速1500-8000rpm、并配有長度70mm，直徑5mm的錐形研磨杵。

4.根據權利要求1或2或3所述的試劑盒，其特征在于，

溶液A：50mM?Tris-HCl、50mM?EDTA、3%SDS、2M?NaCl、1%的β-巰基乙醇，pH8.0；

溶液B：4M的鹽酸胍、20%異丙醇、10mM?EDTA、pH5.0的0.2M的乙酸-乙酸鈉緩沖液；

溶液C：70%的無水乙醇、pH5.0的0.2M的乙酸-乙酸鈉緩沖液；

溶液D：20μg/mL的RNA酶水溶液，用1mol/L?NaOH溶液將pH調到8.0。

5.一種基因組DNA提取方法，其特征在于，利用權利要求1～4任意一項所述的試劑盒進行提取，具體包含以下步驟：

（1）取1.5mL的錐底離心管，加入0.1mg-100mg組織樣本或者10⁶-10⁹細胞樣本與50μL-100μL的溶液A混合；開動研磨器研磨樣本30s-5min，向研磨好的樣本中加入溶液A使樣品終體積為150μL；

（2）漩渦振蕩器震蕩30s，使菌體盡量分散；離心轉速10000g-12000g，時間5min；取上清100μL至一離心管中，加入300μL-600μL的溶液B，上下顛倒混勻；再將混合液加入純化柱中，10000g-12000g，離心30s-1min；棄收集管中的液體，向純化柱中加入300μL-600μL的溶液B，10000g-12000g，離心30s-1min；

（3）棄收集管中的液體，向純化柱中加入500μL-700μL的溶液C，10000g-12000g，離心30s-1min；棄收集管中的液體，向純化柱中加入500μL-700μL的溶液C，10000g-12000g，離心30s-1min；棄收集管中的液體，10000g-12000g，離心2-5min；

（4）將純化柱轉移到另一離心管中，加入30-50μL的溶液D，37℃放置5min；10000g-12000g，離心1-2min；即得到提取的基因組DNA溶液。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述細胞樣本為哺乳動物細胞、細菌、酵母菌、血液或骨髓；所述細胞樣品還經如下預處理：將細胞樣品在轉速≥5000rpm的離心機中離心5min收集細胞。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述組織樣本為動植物組織或者大型真菌組織；該組織樣本還經剪碎或者磨碎的預處理。

8.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述組織樣本為絲狀真菌，對于生長在固體培養基上的菌絲用牙簽或者移液器槍頭挑取；對于生長在液體培養基中菌絲用轉速≥10000rpm的離心機中離心10min或者是過濾收集菌絲。

9.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述組織樣本為真菌孢子懸液，用轉速≥10000rpm的離心機中離心10min收集孢子或者是使用過濾的方式收集孢子。