[發(fā)明專利]一種血葡萄糖的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410101525.4
• 申請(qǐng)日: 2014-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN103837685A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫希武;郝樹彬;王春光;彭新國(guó);王永慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濰坊鑫澤生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/66
• 分類號(hào): G01N33/66;G01N21/31
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 李江

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明涉及一種血葡萄糖的檢測(cè)方法，具體地說(shuō)，涉及一種酶學(xué)速率法人血清血葡萄糖的檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒，用于體外定量測(cè)定人血清、血漿中的血葡萄糖的濃度，屬于醫(yī)用診斷制劑技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

正常情況下，人體中糖的分解和合成代謝處于動(dòng)態(tài)平衡中，保持相對(duì)恒定。血清葡萄糖是指血液中的葡萄糖濃度，一般禁食8～12h后空腹抽取靜脈血，標(biāo)本在1小時(shí)內(nèi)送檢，血糖測(cè)定是診斷糖尿病的最主要檢查項(xiàng)目之一。

正常參考值成人3.9～6.1mmol/L，足月新生兒2.8～4.5mmol/L。異常結(jié)果分析，生理性增高見于餐后1～2h和情緒緊張時(shí)，但不應(yīng)超過(guò)10mmol/L；生理性降低見于饑餓、妊娠、劇烈運(yùn)動(dòng)后。病理性增高有以下幾種情況：（1）胰島功能低下，胰島素分泌不足的糖尿?。唬?）使血糖升高的激素分泌增多，如嗜鉻細(xì)胞瘤、腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)（庫(kù)欣綜合征）、垂體前葉功能亢進(jìn)（肢端肥大癥）、甲狀腺功能亢進(jìn)等；（3）中樞性疾病，如顱內(nèi)壓增高，顱內(nèi)出血，重癥腦炎，顱腦外傷、腦瘤、腦膜炎等；（4）其他疾病，如慢性胰腺炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、心肌梗死、皮質(zhì)醇增多癥、肢端肥大癥、嗜鉻細(xì)胞瘤、胰高血糖素瘤、肝硬化、妊娠嘔吐、脫水、全身麻醉時(shí)。病理性降低有以下幾種情況：（1）胰島β細(xì)胞瘤，胰島素分泌過(guò)多；（2）降血糖藥物用量過(guò)多；（3）垂體前葉功能減退、腎上腺皮質(zhì)功能減退、艾迪生病、甲狀腺功能減退；（4）長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝炎、肝硬變、糖原累積病、酒精中毒等。

血糖測(cè)定方法很多，迄今為止大體可分為四類：氧化還原法、縮合法、酶法及其他類方法。其中酶法包括葡萄糖氧化酶法（GOD）、己糖激酶法（HK）和葡萄糖脫氫酶法（GDH），其中以GOD法應(yīng)用最為廣泛。己糖激酶（HK）法是目前國(guó)際上公認(rèn)的測(cè)定葡萄糖參考方法，但試劑比較昂貴。目前有很少單位仍沿用鄰甲苯胺法。其他方法已基本沒(méi)有使用。以上方法均為終點(diǎn)法測(cè)定，有一個(gè)共同的缺點(diǎn)就是易受血清本底干擾，而且反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，大大影響了結(jié)果的準(zhǔn)確性和測(cè)定效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)以上不足，提供一種酶學(xué)速率法人血清血葡萄糖的檢測(cè)方法，用于體外定量測(cè)定人血清、血漿中的血葡萄糖的濃度，克服了現(xiàn)有檢測(cè)方法易受血清本底干擾、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)的缺陷，本發(fā)明檢測(cè)方法以酶催化法，創(chuàng)新使用酶學(xué)速率測(cè)定法，完全排除了血清本底的干擾，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于各種生化分析儀器。

本發(fā)明的另一目的是提供一種實(shí)施該檢測(cè)方法的檢測(cè)試劑盒。

為解決以上問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種血葡萄糖的檢測(cè)方法，其特征在于：所述檢測(cè)方法為采用酶學(xué)速率測(cè)定法，根據(jù)在波長(zhǎng)500nm處，反應(yīng)體系吸光度的升高速率與樣本中血葡萄糖的濃度成正比，延遲30～60秒后，測(cè)定30～180秒內(nèi)的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量。

一種優(yōu)化方案，所述吸光度上升速率測(cè)定步驟：

a、制備反應(yīng)液

取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入緩沖液；然后在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對(duì)應(yīng)加入待測(cè)樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，混勻，37℃條件下保溫3～5分鐘，再加入酶試劑，混勻，得到反應(yīng)液；或

將緩沖液和酶試劑按比例混合配成試劑工作液，穩(wěn)定3～5分鐘；然后根據(jù)測(cè)定取所需要的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管，分別加入試劑工作液；再分別在樣本管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)對(duì)應(yīng)加入待測(cè)樣本、蒸餾水及標(biāo)準(zhǔn)液，得到反應(yīng)液；

b、反應(yīng)液在37℃條件下反應(yīng)，延遲30～60秒后，在波長(zhǎng)500nm處讀取反應(yīng)液的吸光度變化，讀數(shù)間隔時(shí)間為30～180秒，計(jì)算平均每分鐘吸光度變化率，得到空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及樣本管內(nèi)反應(yīng)液的每分鐘吸光度變化率。

進(jìn)一步地，所述緩沖液與酶試劑的體積比為5:1～1:1；緩沖液、酶試劑之和與樣本的體積比為200:1～100:1。?

進(jìn)一步地，所述緩沖液為含有25mmol/L對(duì)羥基苯甲酸鹽的0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液。

進(jìn)一步地，所述酶試劑為葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶濃度為5～200U/ml；過(guò)氧化酶濃度為2～30U/ml。

進(jìn)一步地，所述標(biāo)準(zhǔn)液為葡萄糖溶液，濃度為2～7mmol/L。

基于所述檢測(cè)方法的檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒包括包裝盒、緩沖液、酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)液；

所述緩沖液為含有25mmol/L對(duì)羥基苯甲酸鹽的0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液。

進(jìn)一步地，所述酶試劑為葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶濃度為5～200U/ml；過(guò)氧化酶濃度為2～30U/ml。