[發(fā)明專利]一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒及其制備和檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410101308.5
• 申請日: 2014-03-19
• 公開（公告）號: CN103834741A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 祝潔;張勇
• 申請（專利權(quán)）人: 四川萬可泰生物技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 謝敏

1.一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒的引物，其特征在于：所述引物為5'-?TTGGGATAGCCATTGGAAACG?-3'

3'-?GTTCCGATACTGCCCATAGGC?-5'。

2.權(quán)利要求1所述的引物的擴增方法，其特征在于：該方法包括以下步驟

熔鏈：在92-96℃下進行8-10s；

退火延伸：在54-66℃下進行25-30s，退火延伸是在同樣的溫度下進行；

該兩個步驟按順序循環(huán)30cycle。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物的擴增方法，其特征在于：所述退火溫度為62℃。

4.一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒，其特征在于：包括權(quán)利要求1所述的引物R1，還包括R2試劑、R3試劑，所述R2試劑為SYBR?Green?Taq?MIX，所述R3試劑為無菌蒸餾水。

5.一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：該檢測方法采用權(quán)利要求4所述的無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒，包括以下步驟：

（1）無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒配置：將引物R1用無菌蒸餾水稀釋到終濃度8-10μM，再將稀釋后的R1試劑、R2試劑，R3試劑分別包裝或預(yù)混合包裝得PCR擴增管，制得試劑盒；

（2）PCR模板制備：將糞便樣品處理或口腔樣本處理后制得PCR模板；

（3）試劑盒操作：將PCR模板加入預(yù)裝有試劑的PCR擴增管中，在PCR擴增儀上如權(quán)利要求2或3所述的引物擴增方法進行反應(yīng)，得到擴增產(chǎn)物；

（4）檢測：（a）定性PCR檢測：在普通PCR儀上擴增，取擴增產(chǎn)物在3%的瓊脂糖膠中進行電泳，凝膠成像觀察結(jié)果；

（b）定量PCR檢測：在實時熒光定量PCR儀上進行擴增，根據(jù)達到熒光閾值的循環(huán)數(shù)，確定模板中幽門螺桿菌的數(shù)量。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：所述糞便樣品處理：取10-50g的糞便溶解到無菌水中混勻，然后利用梯度離心法去除糞便中的雜質(zhì)獲得上層清液，再將上層清液用離心法獲得菌沉淀，再用無菌水將菌沉淀溶解獲得菌溶液，取菌溶液作為PCR模板。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：所述口腔樣本的處理為用無菌棉簽在口腔內(nèi)旋轉(zhuǎn)蘸取舌胎至咽喉處的口腔粘液，用無菌水溶解粘液得菌溶液，取菌溶液作為PCR模板。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種無創(chuàng)幽門螺桿菌基因檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：引物、R1試劑、R2試劑和PCR模板體積為：R1試劑為0.3-0.6份,R2試劑為8-12份，R3試劑為6-9份，PCR模板為1-3份。