[發明專利]通過檢測HLA-DR表達量評估CD14陽性細胞抗原呈遞能力的方法

無效

• 申請號: 201410099263.2
• 申請日: 2014-03-18
• 公開（公告）號: CN103852407A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 刁宏燕;陳佳寧;楊介鉆;魏應鳳;崔光瑩;丁玉龍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

技術領域

本發明涉及臨床檢測領域，具體為通過檢測外周血液內CD14陽性細胞表面的HLA-DR表達量來評估CD14陽性細胞抗原呈遞能力。

背景技術

CD14是一種主要存在于單核細胞、巨噬細胞等細胞表面的白細胞分化抗原，是外周血單個核細胞重要的表面分子標記。人類編碼CD14的基因位于人5號常染色體的長臂端5q23-q31，約含有1338個核苷酸殘基。從核苷酸的第76位到1200位，編碼一段有375個氨基酸殘基的多肽鏈。根據結構和性質，CD14糖蛋白可分為兩類：膜表面的CD14(mCD14)與可溶性的CD14（sCD14）。mCD14分子量為55kDa，其蛋白質部分由包括356個氨基酸殘基組成的多肽鏈和一個由19個氨基酸殘基組成的末端多肽鏈構成，其末端強疏水性多肽鏈通過糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨固于細胞膜。sCD14蛋白質結構與mCD14基本相同，但sCD14不含有PI結構，故分子量較mCD14小，約為48kDa。在體外單核細胞培養中，糖皮質激素能夠抑制單核細胞表達和釋放CD14；。在體內，急性炎癥患者接受糖皮質激素治療時，血清sCD14濃度和外周血單核細胞表面mCD14的表達都被顯著抑制。臨床上給予病人類固醇激素治療時，因其抑制mCD14的表達和sCD14的釋放，可能會增加感染的危險性。CD14生物學功能主要是識別、結合外來抗原分子（特別是細菌抗原），介導單核細胞活化，在炎癥、內毒素血癥等病理反應中起重要作用。已應用于臨床檢測內毒素血癥、內毒素休克等。

HLA-DR是MHC-II類分子，含有2個分子量分別為36kD和27kD的亞基（α亞基和β亞基），該分子主要表達于B淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、活化T淋巴細胞、活化NK淋巴細胞和人祖細胞上。HLA-DR用于外周血B淋巴細胞及單核細胞的計數；鑒定淋巴瘤及白血??；活化T淋巴細胞上HLA-DR抗原的表達及外周血、淋巴組織中樹突狀細胞亞群的研究。

據世界衛生組織數據顯示，從2013年4月1日我國衛生和計劃生育委員會向世界衛生組織首次通報發生了三起人感染甲型H7N9禽流感到2014年2月7日截止，我國一共發生298起人感染H7N9禽流感病例，其中死亡57例。

甲型H7N9禽流感病毒由H7的HA基因和N9的NA基因以及甲型H9N2病毒的6個內部基因片段組成的重配病毒。到目前為止，所有來自人、禽和環境中的H7N9病毒具有較高的同源性，對金剛烷類抗病毒藥物耐藥，部分患者病毒體外研究表明，病毒對奧司他韋和扎那米韋敏感，且多數來自患者的病毒的相關突變（PB2基因的E627K）使其更加適應對于哺乳動物的感染。感染患者的最常見的首發癥狀和體征為流感伴隨的典型表現但不包括鼻塞和流涕，對于臨床和實驗室確診的患者，目前采取神經氨酸酶抑制劑和支持治療以外，沒有有效可靠的治療方法。在實驗室確證H7N9患者的過程中，患者外周血中白細胞和淋巴細胞均減少，免疫功能受到影響。此外，在膿毒血癥等重度感染患者的外周血中HLA-DR隨感染嚴重程度急劇下降。在感染和病原體清除過程中，抗原提呈是免疫應答激活的中心環節?？乖蔬f過程包括吞噬、加工處理抗原，并將處理過的抗原呈遞給效應細胞。因此，找到與患者重度感染時抗原提呈能力相關的中心點，將會為臨床治療重度感染提供幫助。

現有技術中，對CD14陽性細胞抗原呈遞能力的檢測主要是通過普通流式細胞術實現的，多用于膿毒血癥等細菌引起的感染性疾病。但該方法尚未得到確切的量化，在病毒感染的疾病中的應用也尚未明確提出，檢測方法的準確性尚待進一步加強。因此，尋找一套替代方案是十分必要的。

發明內容

本發明要解決的技術問題是，克服現有技術中的不足，提供一種通過檢測HLA-DR表達量評估CD14陽性細胞抗原呈遞能力的方法。

為解決技術問題，本發明提供以下技術方案：

提供一種通過檢測HLA-DR表達量評估CD14陽性細胞抗原呈遞能力的方法，包括以下步驟：

（1）從感染甲型H7N9的患者外周血中篩選出CD14和HLA-DR這一組特征性細胞表面分子標記；

（2）通過流式細胞術檢測CD14和HLA-DR在外周血中的表達量；

（3）當HLA-DR占CD14陽性細胞的比例為63.16%～95.32%（是指平均值79.24%的95%可信區間）時，表示CD14陽性細胞抗原呈遞能力處于正常范圍；當HLA-DR占CD14陽性細胞的比例低于63.16%時，表示CD14陽性細胞呈遞能力弱。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：