[發明專利]通過檢測HLA-DR表達量評估CD14陽性細胞抗原呈遞能力的方法無效
| 申請號： | 201410099263.2 | 申請日： | 2014-03-18 |
| 公開（公告）號： | CN103852407A | 公開（公告）日： | 2014-06-11 |
| 發明（設計）人： | 刁宏燕;陳佳寧;楊介鉆;魏應鳳;崔光瑩;丁玉龍 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | G01N15/10 | 分類號： | G01N15/10 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務所有限公司 33212 | 代理人： | 周世駿 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 通過 檢測 hla dr 表達 評估 cd14 陽性 細胞 抗原 呈遞 能力 方法 | ||
1.通過檢測HLA-DR表達量評估CD14陽性細胞抗原呈遞能力的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）從感染甲型H7N9的患者外周靜脈血中篩選出CD14和HLA-DR這一組特征性細胞表面分子標記；
（2）通過流式細胞術檢測CD14和HLA-DR在外周血中的表達量；
（3）當HLA-DR占CD14陽性細胞的比例為63.16%～95.32%時，表示CD14陽性細胞抗原呈遞能力處于正常范圍；當HLA-DR占CD14陽性細胞的比例低于63.16%時，表示CD14陽性細胞呈遞能力弱。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）的具體實施過程如下：
A、H7N9患者血的收集：
收集重癥H7N9患者的外周靜脈血全血樣本至少10例、輕癥H7N9患者的外周靜脈血全血樣本至少10例；患者已通過年齡、體溫指標及根據臨床表現評估的APACHEⅡ和PMEWS評分明確診斷患有重癥或輕癥H7N9病毒感染；另外收集健康體檢對照者全血；
B、檢測指標的抗體染色：
將H7N9患者的外周靜脈血全血樣本50微升加入流式管，隨后加入流式抗體anti-CD14-PE10微升和anti-HLA-DR-FITC10微升；待血液和抗體充分混勻后置于4度環境靜置孵育30分鐘。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）的具體實施過程如下：
A、白細胞懸液的制備：
將已經孵育制備的樣本取出，加入人紅細胞裂解液HLA1毫升，充分混勻并不間斷輕微震蕩至液體澄清，加入PBS約3毫升，終止裂解反應；離心1200rpm，5分鐘后，棄掉上清液體，打散底部細胞，再加入500微升制備成白細胞懸液；
B、流式檢測外周相應指標：
將制備好的白細胞懸液樣本置于流式細胞儀上樣架，選擇FL1和FL2通道上機檢測CD14和HLA-DR指標的表達量。
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