[發(fā)明專利]通過檢測(cè)HLA-DR表達(dá)量評(píng)估CD14陽性細(xì)胞抗原呈遞能力的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410099263.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-18
• 公開（公告）號(hào): CN103852407A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 刁宏燕;陳佳寧;楊介鉆;魏應(yīng)鳳;崔光瑩;丁玉龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N15/10
• 分類號(hào): G01N15/10
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.通過檢測(cè)HLA-DR表達(dá)量評(píng)估CD14陽性細(xì)胞抗原呈遞能力的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從感染甲型H7N9的患者外周靜脈血中篩選出CD14和HLA-DR這一組特征性細(xì)胞表面分子標(biāo)記；

（2）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD14和HLA-DR在外周血中的表達(dá)量；

（3）當(dāng)HLA-DR占CD14陽性細(xì)胞的比例為63.16%～95.32%時(shí)，表示CD14陽性細(xì)胞抗原呈遞能力處于正常范圍；當(dāng)HLA-DR占CD14陽性細(xì)胞的比例低于63.16%時(shí)，表示CD14陽性細(xì)胞呈遞能力弱。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）的具體實(shí)施過程如下：

A、H7N9患者血的收集：

收集重癥H7N9患者的外周靜脈血全血樣本至少10例、輕癥H7N9患者的外周靜脈血全血樣本至少10例；患者已通過年齡、體溫指標(biāo)及根據(jù)臨床表現(xiàn)評(píng)估的APACHEⅡ和PMEWS評(píng)分明確診斷患有重癥或輕癥H7N9病毒感染；另外收集健康體檢對(duì)照者全血；

B、檢測(cè)指標(biāo)的抗體染色：

將H7N9患者的外周靜脈血全血樣本50微升加入流式管，隨后加入流式抗體anti-CD14-PE10微升和anti-HLA-DR-FITC10微升；待血液和抗體充分混勻后置于4度環(huán)境靜置孵育30分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）的具體實(shí)施過程如下：

A、白細(xì)胞懸液的制備：

將已經(jīng)孵育制備的樣本取出，加入人紅細(xì)胞裂解液HLA1毫升，充分混勻并不間斷輕微震蕩至液體澄清，加入PBS約3毫升，終止裂解反應(yīng)；離心1200rpm，5分鐘后，棄掉上清液體，打散底部細(xì)胞，再加入500微升制備成白細(xì)胞懸液；

B、流式檢測(cè)外周相應(yīng)指標(biāo)：

將制備好的白細(xì)胞懸液樣本置于流式細(xì)胞儀上樣架，選擇FL1和FL2通道上機(jī)檢測(cè)CD14和HLA-DR指標(biāo)的表達(dá)量。