[發(fā)明專利]一種檢測α2珠蛋白基因點突變的巢式非對稱PCR試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410098630.7
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN103898213A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周萬軍;熊符;徐湘民
• 申請（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

1.用于檢測α2珠蛋白基因點突變的巢式非對稱熒光PCR試劑盒，所述試劑盒包括：

（1）用于特異性擴增α2珠蛋白全序列的引物對；

（2）用于擴增CD30/CD31目的片段DNA單鏈的引物；

（3）用于擴增WS/QS/CS目的片段DNA單鏈的引物；

（4）特異性檢測α2珠蛋白基因WS、QS、CS、CD30、CD31五個點突變序列的野生型及突變型的熒光探針，以及相對應(yīng)的淬滅探針，通過在熒光探針上修飾不同的熒光信號和/或不同的解鏈溫度來區(qū)分WS、QS、CS、CD30、CD31五個點突變序列的野生型及突變型；

所述用于特異性擴增α2珠蛋白全序列的引物對的Tm值比其他引物或熒光探針、淬滅探針的Tm值高5-10℃。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述用于特異性擴增α2珠蛋白全序列的引物對的Tm值≥72℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，用于擴增目的片段DNA單鏈的引物的Tm值≤63℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，特異性檢測α2珠蛋白基因WS、QS、CS、CD30、CD31五個點突變序列的熒光探針以及相對應(yīng)的淬滅探針的Tm值≤63℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述用于特異性擴增α2珠蛋白全序列的引物Tm值為72℃-74℃，其中：正向引物位于α2珠蛋白基因第1外顯子5’端UTR區(qū)域；反向引物位于α2珠蛋白基因第3外顯子3’端UTR區(qū)域，該區(qū)域須避開與α1珠蛋白基因的同源序列，從而保證擴增α2珠蛋白基因的特異性與準(zhǔn)確性。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的試劑盒，其特征在于，所述用于特異性擴增α2珠蛋白全序列的引物對如下所示：

F：5’-?gctcgcgggccggcact?-?3’（SEQ?ID?NO.?1），

R：5’-ctccattgttggcacattccgggatag-3’（SEQ?ID?NO.?2）。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：?1）所述用于擴增CD30/CD31目的片段DNA單鏈的引物，是位于CD30/CD31突變3’端100-130bp位置的反向擴增引物，Tm值62℃-64℃；?2）所述用于擴增WS/QS/CS目的片段DNA單鏈的引物，是位于CS突變3’端10-35bp，距權(quán)利5所列特異性α2珠蛋白全序列3’末端2-5bp的反向擴增引物，Tm值62℃-64℃。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的試劑盒，其特征在于：

1）所述用于擴增CD30/CD31目的片段DNA單鏈的引物序列為：5’-ctgcggggagaagcagagt?-3’（SEQ?NO.?3）；

2）所述用于擴增WS/QS/CS目的片段DNA單鏈的引物序列為：5’-?gggcaggaggaacggctac?-3’（SEQ?NO.4）。