[發明專利]一種重組人細小病毒B19蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201410098047.6
• 申請日: 2014-03-17
• 公開（公告）號: CN103849630A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 張曉剛;張秀杰;華艷
• 申請（專利權）人: 北京英諾特生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/35
• 分類號: C12N15/35;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/015;G01N33/68;G01N33/569;C12R1/19
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 呂世靜

1.一種編碼人細小病毒B19蛋白核酸，如SEQ?ID?NO.1所示。?

2.一種人細小病毒B19蛋白，其特征在于它由權利要求1所述的核酸編碼，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。?

3.包含權利要求1所述核酸的人細小病毒B19蛋白的表達載體，其特征在于它是將權利要求1所述的核酸插入到質粒pET-21a上得到的重組pET-21a-B19質粒。?

4.一種重組人細小病毒B19蛋白的制備方法，其特征在于應用權利要求1的重組DNA構建表達載體，并在該載體所適合的原核宿主細胞中表達權利要求1所述重組DNA編碼的重組人細小病毒B19蛋白，包括以下步驟：?

1）獲得具有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；?

2）將該核苷酸序列導入質粒；?

3）將該質粒導入原核宿主細胞；?

4）培養所述宿主細胞；?

5）回收、純化及復性所表達的重組蛋白。?

5.根據權利要求2所述的人細小病毒B19蛋白在制備檢測試劑盒中的應用。?

6.一種表達人細小病毒B19蛋白的工程菌株，其特征在于它含有權利要求3所述的表達載體pET-21a-B19，宿主菌為大腸桿菌，保藏編號為CGMCC?No.8893，該菌株于2014年03月05日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101。?

7.一種檢測人細小病毒B19感染的試劑盒，其特征在于所述試劑盒中的抗原是權利要求2所述的人細小病毒B19蛋白。?

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于用于標記人細小病毒B19蛋白的標記物為膠體金或辣根過氧化物酶。?

9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于抗人IgM抗體劃線包被濃度為1.0mg/ml，抗人IgM抗體劃線量為1.0μl/cm，人細小病毒B19抗原膠體金復合物在濃縮原液到稀釋一倍之間包被載金墊，所述抗原膠體金結合物噴點量為60μL/cm²，小鼠IgG膠體金結合物噴點量為14μL/cm²，羊抗鼠IgG抗體包被量為1.0μl/cm，包被濃度為1.0mg/ml。?