[發明專利]一種酮還原酶突變體及其制備和應用有效
| 申請號： | 201410097433.3 | 申請日： | 2014-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN104928265B | 公開（公告）日： | 2018-01-02 |
| 發明（設計）人： | 陳峻青;石利平;尹曉龍;王清 | 申請（專利權）人： | 江蘇阿爾法藥業有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/04 | 分類號： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/21;C12N1/19;C12P17/12;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司32218 | 代理人： | 傅婷婷,徐冬濤 |
| 地址： | 223800 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 還原酶 突變體 及其 制備 應用 | ||
1.一種酮還原酶突變體基因，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示。
2.權利要求1所述的基因編碼的酮還原酶突變體，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.含有權利要求1所述的酮還原酶突變體基因的重組表達載體。
4.一種生產權利要求2所述的酮還原酶突變體的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌中包含權利要求1所述的酮還原酶突變體基因。
5.根據權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的宿主細胞選自大腸埃希氏菌（Escherichia coli）BL21(DE3)、釀酒酵母或巴斯德畢赤酵母中的一種。
6.根據權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的載體系統為pUC19或者pSE380。
7.一種酮還原酶突變體多肽的制備方法，其特征在于包括如下步驟：培養權利要求4~6中任一項所述的基因工程菌，獲得酮還原酶突變體多肽。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于在一定生產罐發酵條件下，對權利要求4~6中任一項所述的基因工程菌進行工業化發酵制備所述的酮還原酶突變體多肽。
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述生產罐發酵條件是：DO 30%以上，空氣流量1:1.5 vvm，葡萄糖殘余量1% 以下。
10.權利要求2所述的酮還原酶突變體作為催化劑在不對稱還原2-[3-[3-(2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-氧代丙基]苯甲酸甲酯中的應用。
11.根據權利要求10所述的應用，其特征在于，所述的應用按下述方法進行：在pH 7.0的磷酸鹽緩沖液中，在NAD+、甲酸脫氫酶、甲酸存在下，在權利要求2所述的酮還原酶突變體作用下，不對稱還原2-[3-[3-(2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-氧代丙基]苯甲酸甲酯，制得光學手性醇。
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