[發明專利]一種大田馬鈴薯植株氮素營養分子診斷方法及在施肥上的應用

有效

• 申請號: 201410094874.8
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN103923978A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 胡新喜;熊興耀;劉明月;馮燕青;何長征;雷艷
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;A01C21/00
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 劉江良

1.一種大田馬鈴薯植株氮素營養分子診斷方法，其特征在于，以馬鈴薯植株氮素吸收相關的硝酸還原酶基因NR的表達量來確定診斷大田馬鈴薯植株氮素營養狀況。

2.根據權利要求1所述的大田馬鈴薯植株氮素營養分子診斷方法，其特征在于，以肌動蛋白基因Actin基因為內參，采用Real?time?PCR方法檢測硝酸還原酶基因NR的相對表達量，以判斷大田馬鈴薯植株氮素營養狀況。

3.根據權利要求1所述的大田馬鈴薯植株氮素營養的分子診斷方法，其特征在于，Real?time?PCR中用于擴增NR基因的引物的序列為：正向引物如SEQ?ID?NO.1所示；反向引物如SEQ?ID?NO.2所示。

4.根據權利要求1所述的大田馬鈴薯植株氮素營養的分子診斷方法，其特征在于，作為內參基因的Actin基因的擴增引物為:?正向引物如SEQ?ID?NO.3所示；反向引物如SEQ?ID?NO.4所示。

5.根據權利要求1至4任一項所述的大田馬鈴薯植株氮素營養的分子診斷方法，其特征在于包括如下步驟：

1）馬鈴薯植株葉片RNA的獲得：田間取馬鈴薯植株頂端第一片完全展開葉,通常是第四片葉,液氮處理并帶回實驗室,采取trizol方法提取RNA；

2）以步驟1）得到的RNA為模板，通過反轉錄，得到cDNA；

3）以步驟2）得到的cDNA為模板，進行Real?time?PCR擴增；

4）通過分析、計算得出NR基因的相對表達量，根據擬合公式計算施氮量。

6.根據權利要求1至5任一項所述分子診斷方法在大田馬鈴薯植株施用氮肥中的應用，其特征在于，

第一步，根據權利要求1至5任一項所述的大田馬鈴薯植株氮素營養的分子診斷方法得到硝酸還原酶基因NR的相對表達量，

第二步，根據第一步所得到的表達量確定大田馬鈴薯植株氮素營養狀況，并確定是否施用氮肥或其施肥量，

第三步，對所述大田馬鈴薯植株施用確定的氮肥。

7.根據權利要求5所述的大田馬鈴薯植株氮肥的施肥方法，其特征在于，

第二步確定施氮量N按公式計算得到：N=-6.7891*ΔCt²-37.622*ΔCt-43.033

其中,施氮量N單位為純N?kg/667m²，且當N大于零時，需追施氮肥，當N小于零時，不用追施氮肥；ΔCt?=?Ct_NR-Ct_Actin，Ct_NR和Ct_Actin?分別表示硝酸還原酶基因NR和內參基因肌動蛋白基因Actin在?Real?time?PCR擴增過程中每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值所經歷的循環數。

8.根據權利要求7所述的大田馬鈴薯植株氮肥的施肥方法，其特征在于，施用確定的氮肥按下述擬合公式計算得到：N=-6.7891*ΔCt²-37.622*ΔCt-43.033，其中施氮量N的單位為純氮kg/667m²。