[發(fā)明專利]一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色譜測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410093955.6
• 申請(qǐng)日: 2014-03-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103822989A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊進(jìn);石龍凱;胡清源;王安;劉勇;侯宏衛(wèi);劉彤;韓書磊;吳帥賓;陳歡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

1.一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定方法，其特征在于：包括以下工藝步驟：

a、收集志愿者尿液；

b、樣品前處理：室溫下解凍尿液樣品，混合均勻后，經(jīng)過(guò)0.22?μm的水相濾膜過(guò)濾，取1.0?mL的尿液，加入1.0?mL?6?mol/L的鹽酸和4.0?mL由二氯甲烷：異丙醇按9:1配成的混合萃取溶液，以2000?r/min振蕩提取3分鐘，10000?r/min離心1分鐘，取下層有機(jī)相1.0?mL，于40℃氮吹至干，加入0.2?mL0.01%混合酸水溶液復(fù)溶，取5?μL引入超高效液相色譜儀分離分析；

c、標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：用純水配制不同濃度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

d、超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定，吸取配制好的不同濃度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入超高效液相色譜系統(tǒng)，苯乙醛酸和苯乙醇酸的線性回歸方程分別為y?=?1.12×10⁵x+1.36×10⁴和y?=?1.94×10⁴x－2.48×10³，其中y代表目標(biāo)分析物的峰面積，x表示尿液中目標(biāo)分析物的濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均大于0.9990，對(duì)樣品待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定，得到分析物的色譜峰面積，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測(cè)液中分析物的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定方法，其特征在于：苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為0.085，0.17，0.425，0.85，4.25和8.5?μg/mL和0.25，0.5，1，2，10和20?μg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定方法，其特征在于：選取Waters?ACQUITY?UPLC^??BEH色譜柱，規(guī)格50?mm×2.1?mm，1.7?μm；流動(dòng)相體系為甲醇：0.01%混合酸水溶液，兩者比例為15:85，等度洗脫；流動(dòng)相流速為150?μL/min；分析時(shí)間為8?min；進(jìn)樣量為5?μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定方法，其特征在于：超高效液相色譜檢測(cè)器條件：光電二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：225?nm、254?nm；柱溫箱溫度：30℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定方法，其特征在于：所述0.01%混合酸水溶液的配制方法為：吸取醋酸、85%磷酸各1.0?mL稀釋至100?mL容量瓶中，置冰箱存放，用時(shí)取10mL用水稀釋至1L，即為0.01%混合酸水溶液。