[發明專利]構建液相色譜-質譜數據庫檢測未知毒物的方法

有效

• 申請號: 201410093316.X
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN103823008A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 邵兵;張晶;郭巧珍;楊奕;尹杰
• 申請（專利權）人: 北京市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測未知毒物的方法，具體的涉及一種構建液相色譜-質譜數據庫檢測未知毒物的方法，特別用于食物中毒中未知毒物的檢測。

背景技術

毒物是指在一定的條件下，不論以何種方式，小劑量作用于機體，與機體產生物理或化學作用，導致機體正常生理機能的破壞，引起一系列病理改變、甚至危及生命造成死亡的物質。食物中毒是指攝入了含有生物性、化學性有毒有害物質的食品或者把有毒有害物質當作食品攝人后出現的非傳染性的急性、亞急性疾病。據統計，我國每年發生的食物中毒事件有幾百至上千起，涉及人數上萬。食物中毒不僅嚴重危害人們的身體健康，而且造成不良的社會影響，引起廣泛關注。能否準確、快速處理食物中毒事件已成為衛生、公安等部門技術能力建設的重點之一。

中毒事件中的毒物分析不同于一般常規分析而另有其特點，如有些中毒癥狀難以與疾病區分，一般中毒案件多為未知物分析，近代毒物種類繁多、若要確認為某一種宛如大海撈針；檢驗材料特別、數量有限、不可復得，分析方法多變，有時需負法律責任等。而且，對毒物的鑒定分析一般要求在最短的時間內完成，就不可能按常規方法作逐一分析鑒定。所以，毒物分析工作必須確定檢驗重點，有目標、有針對性地進行，以達到準確、快速的目的。

在所有的食物中毒事件中，化學性物質引起的中毒占40％左右，這類中毒具有發病急、中毒癥狀重、致死率高(占所有食物中毒致死人數的一半以上)的特點。應對化學性食物中毒事件時，快速有效的確定致毒物質是后續處理和臨床治療的關鍵。及時排查出中毒原因、鎖定毒物是確保醫生對癥下藥、準確處理傷情的前提，這樣能夠促進患者康復，顯著降低中毒死亡率。所以，為了保證化學性食物中毒檢測結果的準確、及時，必須對中毒經過和毒物來源作深人細致的調查和取樣，一些針對特定物質(如亞硝酸鹽、重金屬類、砷、汞、氰化物等)的快速檢測方法也相繼建立起來。盡管如此，考慮到食物中毒多樣性和復雜性，這些快檢方法都具有一定的局限性和單一性，每年仍有大量的中毒事件不能查明其原因。因此，未知中毒物的篩查確認工作依然是衛生檢驗工作者面臨的巨大挑戰。

現階段，未知物的篩查主要是通過質譜比對和標準樣品確證來完成。隨著質譜技術的發展，通過數據庫的比對查詢來確認未知化合物變得相對簡單易行。目前常用的有機質譜數據庫主要是與氣相色譜-質譜技術匹配的數據庫，包括美國國家標準研究所的NIST質譜庫(190000余種化合物，220000余張譜圖)和Wiley質譜庫(300000余種化合物，400000余張譜圖)，基本涵蓋了常見揮發性毒物。但是，對于由難揮發、易熱解的有毒化合物造成的很多食物中毒，現有的商業化質譜數據庫遠不能滿足食物中毒應急處置的需要。

對于難揮發性化合物，目前的確證方法一般采用高效液相色譜一串聯四極桿質譜(LC-MS／MS)、液相色譜一串聯四極桿／飛行時間質譜(LC-Q-TOF)等技術。但是，由于LC-MS一般采用軟電離的方式，而且不同公司的液相色譜-質譜的質譜設計原理不同，分析參數不盡相同，沒有一個統一可比或匹配的質譜圖，各個公司得到的質譜圖差別可能很大，這就給采用液質分析的質譜庫的統一帶來了難度。但各公司的儀器得到的質譜圖準分子離子峰和質譜碎片是相同的，可以用作快速篩選，與中毒癥狀的判斷結果進行對比，同時通過液相色譜色譜柱、流動相條件、保留時間等，可以進行進一步的定性確認。

本發明根據上述情況，構建常見毒物、藥物的液相色譜質譜數據庫，開發一種基于液相色譜質譜信息的毒物篩查方法，為不明原因食物中毒等事件的排查提供技術和方法依據。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型的、可通過液相色譜質譜信息快速檢索和篩查的常見毒物藥物的方法，根據對已有的資料查詢，篩選出常見食物中毒事件的毒物，建立其LC-MS質譜數據庫，該庫將基于保留時間和質譜碎片進行定性，可用于未知致毒物質的快速篩查，為實驗室處理食物中毒或藥物中毒等相關突發事件提供技術支持。

本發明提供的構建液相色譜-質譜數據庫檢測樣品中未知毒物的方法，包括：(1)采用超高效液相色譜-四級桿飛行時間質譜方法構建常見毒物的液相色譜-質譜數據庫；(2)樣品處理和檢測，將待測樣品用甲醇或乙腈超聲提取得提取液，將所述提取液離心，取上清液，在與步驟(1)相同的測試方法和測試條件下，測定所述上清液的液相色譜-質譜圖；(3)將步驟(2)所述的液相色譜-質譜圖與步驟(1)所述的常見毒物的液相色譜-質譜數據庫進行比對，判斷樣品中未知毒物的種類。