[發(fā)明專(zhuān)利]cDNA的合成方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410089861.1
• 申請(qǐng)日: 2014-03-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104046613A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 齊藤祐司;高城富美男
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 精工愛(ài)普生株式會(huì)社
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 金世煜;苗堃

1.一種cDNA合成方法，其特征在于，包括以下工序：

吸附工序，在含有核糖核酸RNA的試樣中混合含有離液物質(zhì)的溶解液和核酸結(jié)合性固相載體，將RNA吸附于所述載體上，

逆轉(zhuǎn)錄工序，將吸附于所述載體的RNA在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液中以吸附于所述載體的原樣直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA，以及

溶出工序，將合成的所述cDNA溶出至溶出液中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的cDNA合成方法，其中，在逆轉(zhuǎn)錄工序之前，進(jìn)一步包括將吸附有所述RNA的所述載體用清洗液清洗的工序。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的cDNA合成方法，其中，在逆轉(zhuǎn)錄工序之后，進(jìn)一步包括將吸附有所述RNA的所述載體用不含有機(jī)溶劑的清洗液清洗的工序。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中的任一項(xiàng)所述的cDNA合成方法，其特征在于，所述逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液含有逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP、逆轉(zhuǎn)錄用引物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中的任一項(xiàng)所述的cDNA合成方法，其特征在于，所述溶出液含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA擴(kuò)增用引物。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中的任一項(xiàng)所述的cDNA合成方法，其特征在于，所述逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液和/或溶出液含有BSA。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中的任一項(xiàng)所述的cDNA合成方法，其特征在于，所述逆轉(zhuǎn)錄工序中，在小于50℃的條件下將所述RNA逆轉(zhuǎn)錄。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中的任一項(xiàng)所述的cDNA合成方法，其特征在于，所述載體是磁性粒子。

9.一種cDNA合成試劑盒，其特征在于，含有：

含4～7M的胍鹽、0～5%的非離子性表面活性劑和0～0.2M的還原劑的中性溶解液，

核酸結(jié)合性固相載體，

含4～7M的胍鹽和0～5%的非離子性表面活性劑的第1清洗液，

由水或低鹽濃度水溶液組成的第2清洗液，

含逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP以及逆轉(zhuǎn)錄用引物的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，以及

含DNA聚合酶、dNTP以及DNA擴(kuò)增用引物的DNA擴(kuò)增液。