[發明專利]一種基于LAMP技術快速檢測多菌靈高抗核盤菌菌株的方法有效
| 申請號： | 201410089651.2 | 申請日： | 2014-03-12 |
| 公開（公告）號： | CN103820563A | 公開（公告）日： | 2014-05-28 |
| 發明（設計）人： | 周明國;段亞冰;葛常艷;張曉柯 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210095 江蘇省南*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 lamp 技術 快速 檢測 多菌靈高抗核 盤菌 菌株 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于LAMP技術快速檢測多菌靈高抗核盤菌菌株的方法，步驟是：
(1)運用2對特異性引物對待鑒定菌株的基因組DNA進行LAMP恒溫擴增，其中所述的2對特異性引物的堿基序列分別是：
LAMP反應所用的外引物對：
F3：TCGCCAAAGGTTTCCGATAC
B3：ACCAGGGAAACGGAGACAG
LAMP反應所用的內引物對(含人為引入錯配堿基)：
FIP：GGCGTCAGAGTTCTCGACCAACGTCGTCGAGCCATATAACG
BIP：CGTCAGAGTTCTCGACCAACGTCGTCGAGCCATATAACG
(2)對上述LAMP擴增產物觀察其顏色變化，并在3.0％瓊脂糖凝膠電泳上分離，觀察擴增結果；
(3)鑒定是否為多菌靈高抗核盤菌菌株：如果LAMP擴增產物顯示天藍色，這時電泳圖譜應為梯狀條帶，判定為多菌靈高抗核盤菌菌株；如果擴增產物為紫色，這時電泳圖譜無條帶擴增，判定為多菌靈敏感核盤菌菌株。
2.根據權利要求1所述快速檢測多菌靈高抗核盤菌菌株的方法，其特征在于：步驟(1)所述的LAMP反應體系及條件分別是：
反應體系(10μL)：
反應條件：
63℃60min，80℃10min。
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