[發(fā)明專利]禾谷縊管蚜ACT1內(nèi)參基因部分序列、克隆方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410088424.8
• 申請日: 2014-03-11
• 公開（公告）號: CN103820462A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設計）人: 王錫鋒;武科科;劉艷
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.禾谷縊管蚜ACT1基因片段，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.一種禾谷縊管蚜ACT1基因的部分序列的克隆方法，提取禾谷縊管蚜基因組總RNA，采用引物ACT1R進行RT-PCR擴增，以產(chǎn)物第一鏈cDNA作為模板、以引物對ACT1F/ACT1R進行PCR擴增，得到陽性克隆，最后經(jīng)測序驗證。其中引物序列為：

ACT1F:5′-ATGTGTGACGAAGAAGTAGC-3′；

ACT1R:5′-TTAGAAGCACTTTCTGTGC-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，所述PCR擴增的反應條件如下：94℃3min，[94℃45s、56℃1min、72℃1min]30個循環(huán)，72℃延長10min，4℃保存。

4.一種qPCR擴增ACT1基因部分序列的方法，抽提禾谷縊管蚜基因組總RNA，以試劑盒自帶引物混合物為引物進行RT反應，然后以產(chǎn)物第一鏈cDNA作為模板進行定量PCR擴增，熒光染料為SYBR?Green?I，其中定量PCR擴增中的禾谷縊管蚜的定量引物，其序列為：

QACT1F：5′-AACGGAAGCACCTTTGAACC-3′；

QACT1R：5′-GGAAGAAGCAGCAGTAGCCAT-3′。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，所述定量PCR擴增采用兩步法，即在95℃預變性15min之后，先運行40個循環(huán)的95℃10sec，59.2℃32sec，72℃32sec，再運行溶解曲線階段的95℃15sec，60℃1min，95℃30sec，60℃15sec。

6.權(quán)利要求1所述的禾谷縊管蚜ACT1基因片段作為內(nèi)參基因應用于禾谷縊管蚜功能基因或介體內(nèi)黃矮病毒基因表達定量PCR檢測的應用。