[發(fā)明專利]一種J亞群禽白血病免疫膠體金抗體檢測試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410088234.6
• 申請日: 2014-03-12
• 公開（公告）號(hào): CN103808945A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 成子強(qiáng);王言明
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種J亞群禽白血病免疫膠體金抗體檢測試紙條，其特征在于：采用了原核表達(dá)后純化的J亞群禽白血病病毒表面蛋白偶聯(lián)免疫膠體金，其中所述的原核表達(dá)后純化的J亞群禽白血病病毒表面蛋白為帶有HIS標(biāo)簽的融合蛋白His-gp85，所述試紙條的制備方法如下：

根據(jù)現(xiàn)有的ALV-J設(shè)計(jì)特異性引物，所述的正向引物為5’-GCGGATCCATCAAGAACGGAACAACACG-3’，含BamHⅠ酶切位點(diǎn)，其基因序列如SEQ?ID?NO.2所示；反向引物為5’-GCGCGCAAGCTTGTCCCCACAAATCAAGAAAATA-3’,含Hind?III酶切位點(diǎn)，其基因序列如SEQ?ID?NO.3所示；

利用上述一對引物以J亞群禽白血病病毒的DNA為模版進(jìn)行PCR擴(kuò)增：

PCR反應(yīng)條件為：95℃5min，充分變性后進(jìn)入循環(huán)體系：95℃40s，65℃1min，72℃1min，循環(huán)35次后72℃延伸10min；

擴(kuò)增產(chǎn)物測序，其基因序列如SEQ?ID?NO.1所示；

利用該基因片段連接pET30a載體，得到了重組載體pET30a—gp85重組質(zhì)粒，使用1mmoL?IPTG誘導(dǎo)表達(dá)得到帶有HIS標(biāo)簽的融合蛋白His-gp85，進(jìn)而利用該蛋白與膠體金偶聯(lián)后涂布于硝酸纖維素膜上，制成試紙條。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于：以NX0101的DNA為模版進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

3.一種J亞群禽白血病免疫膠體金抗體檢測試紙條的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：

根據(jù)現(xiàn)有的ALV-J設(shè)計(jì)特異性引物，所述的正向引物為5’-GCGGATCCATCAAGAACGGAACAACACG-3’，含BamHⅠ酶切位點(diǎn)，其基因序列如SEQ?ID?NO.2所示；反向引物為5’-GCGCGCAAGCTTGTCCCCACAAATCAAGAAAATA-3’,含Hind?III酶切位點(diǎn)，其基因序列如SEQ?ID?NO.3所示；

利用上述一對引物以J亞群禽白血病病毒的DNA為模版進(jìn)行PCR擴(kuò)增：

PCR反應(yīng)條件為：95℃5min，充分變性后進(jìn)入循環(huán)體系：95℃40s，65℃1min，72℃1min，循環(huán)35次后72℃延伸10min；

擴(kuò)增產(chǎn)物測序，其基因序列如SEQ?ID?NO.1所示；

利用該基因片段連接pET30a載體，得到了重組載體pET30a—gp85重組質(zhì)粒，使用1mmoL?IPTG誘導(dǎo)表達(dá)得到帶有HIS標(biāo)簽的融合蛋白His-gp85，進(jìn)而利用該蛋白與膠體金偶聯(lián)后涂布于硝酸纖維素膜上，制成試紙條；

所述的擴(kuò)增模板DNA為NX0101的DNA。