[發(fā)明專利]一種固定化重組磷脂酶B用于植物油脂脫膠的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410088073.0
• 申請日: 2014-03-11
• 公開（公告）號: CN103849461A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李春;戴大章;梁美麗;黃申
• 申請（專利權(quán)）人: 北京理工大學(xué)
• 主分類號: C11B3/00
• 分類號: C11B3/00;C12N11/08
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種固定化重組磷脂酶B用于植物油脂脫膠的方法。

背景技術(shù)

油脂加工業(yè)與農(nóng)業(yè)發(fā)展及食物安全密切相關(guān)，受到世界各國的高度重視；在油脂加工業(yè)中，油脂脫膠是人們一直關(guān)注的焦點(diǎn)之一，脫膠即除去油脂中的膠溶性雜質(zhì)，主要成分是磷脂，磷脂含量過高對油脂制品的風(fēng)味和穩(wěn)定性均產(chǎn)生不利的影響。磷脂主要成分為水化磷脂和非水化磷脂，水化磷脂可以通過傳統(tǒng)的水化脫膠方法去除，但非水化磷脂具有顯著的疏水性，很難去除。脫膠方法經(jīng)過幾十年的發(fā)展，在最初酸法脫膠的基礎(chǔ)上，通過改變操作工藝發(fā)展了如特殊脫膠、超濾脫膠、吸附脫膠、Top脫膠、S.O.F.T脫膠等方法，但是由于各自存在的局限性，很難完全去除植物油中的非水化磷脂，難以滿足各種不同品質(zhì)植物油脫膠的要求。酶法脫膠是20世紀(jì)90年代出現(xiàn)的一種生化脫膠技術(shù)，具有反應(yīng)條件溫和，速度快，副產(chǎn)物少和廢水排放少等優(yōu)點(diǎn)受到越來越多的重視，酶法脫膠可將油中的磷含量降到10mg/kg一下，這項(xiàng)技術(shù)在提高油脂工業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)保效益方面具有巨大的應(yīng)用價值。但是動物、植物、微生物來源的磷脂酶B非常有限，且價格昂貴；在應(yīng)用游離的磷脂酶B進(jìn)行反應(yīng)時，只能應(yīng)用一次而不能回收，造成產(chǎn)物成本較高，很大程度上限制了它在工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用。

酶的固定化，是應(yīng)用固體材料將酶束縛或限制于一定的區(qū)域內(nèi)，酶仍能進(jìn)行催化反應(yīng)、并可回收及重復(fù)使用的一類技術(shù)。酶通過固定化后可以提高活力和穩(wěn)定性，而且易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)化反應(yīng)和自動化生產(chǎn)，實(shí)現(xiàn)重復(fù)利用，提高利用率，降低生產(chǎn)成本，保證酶催化在工業(yè)應(yīng)用中的經(jīng)濟(jì)可行。在酶的固定化中，固定化載體的物理化學(xué)性質(zhì)是影響固定化效率和固定化酶催化能力的重要因素。大孔樹脂是一種人工合成的具有多孔立體結(jié)構(gòu)的聚合物，具有不溶于酸、堿、有機(jī)溶劑和機(jī)械穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)，作為一種新型的固定化載體材料應(yīng)用于酶的固定化。以大孔樹脂為載體，通過范德華力鍵或氫鍵等分子間作用力對磷脂酶進(jìn)行吸附，可提高酶在反應(yīng)體系中的擴(kuò)散效果和熱力學(xué)穩(wěn)定性，調(diào)節(jié)和控制酶的活性與選擇性，并且有利于酶的回收和產(chǎn)品的連續(xù)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明針對游離酶在反應(yīng)體系中難于分離回收，而且酶的制取一般較困難，成本昂貴，難于連續(xù)或反復(fù)使用，提出了用固定化重組磷脂酶B來進(jìn)行植物油脫膠的方法。應(yīng)用固定化重組磷脂酶B來進(jìn)行脫膠的方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：一、重組磷脂酶B的固定化；二、固定化重組磷脂酶B植物油脫膠。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一、重組磷脂酶B的固定化：取0.1-10g重組磷脂酶B溶于10-100ml一定pH的檸檬酸/磷酸氫二鈉緩沖液，離心去除雜質(zhì)，然后加入5-50g?NKA型大孔樹脂，冰浴震蕩吸附一定時間，離心分離，洗滌，冷凍真空干燥，得到固定化的磷脂酶。二、植物油脂脫膠：取植物毛油100g，水浴加熱至80℃，加入一定質(zhì)量濃度為45%、質(zhì)量為植物油毛油0.03%-0.15%的檸檬酸溶液，10000rpm均質(zhì)1min后以500-1000rpm的攪拌速度反應(yīng)20-40min；冷卻至溫度35-55℃左右，加入質(zhì)量濃度4%的NaOH溶液至植物毛油的pH值在4.0-6.0之間停止添加NaOH溶液，加入一定量的蒸餾水和一定量的固定化重組磷脂酶B加入植物毛油中，100-300rpm攪拌2-7小時，然后對加入固定化重組磷脂酶B的植物油以10000rpm-12000rpm的速度離心5-10min，去除雜質(zhì)即可。

本發(fā)明的有益效果

將NKA型大孔樹脂用于重組磷脂酶B的固定化技術(shù)，提高了酶的操作穩(wěn)定性和活性，有利于酶的回收。將固定化重組磷脂酶B應(yīng)用于植物油脂的脫膠中，降低生產(chǎn)成本。

具體實(shí)施方式一：