[發明專利]一種真菌漆酶誘導活性化合物及其發酵制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410085685.4
• 申請日: 2012-05-07
• 公開（公告）號: CN103834695A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 肖亞中;方澤民;劉娟娟;洪宇植;房偉
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C12P7/42
• 分類號: C12P7/42;C12N9/02;C07C59/245;C07C51/42;C12R1/645
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 何梅生;王偉

1.一種對真菌漆酶具有高誘導活性的化合物的發酵制備方法，其特征在于：使用的發酵菌株為Gongronella?sp.，經發酵培養獲得發酵液，所述發酵液經分離純化后獲得如下分子式的純活性化合物：

2.根據權利要求1所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于：所述發酵培養是指將Gongronella?sp.接種在經滅菌的pH4.0～7.0的發酵培養基中，于溫度25～31℃、搖床轉速100～150rpm條件下培養3～7天后通過紗布過濾收集發酵液備用；所述的發酵培養基為每升水中含10～20g蔗糖、1～2g?DL-天冬酰胺、0.7～1.5g?KH₂PO₄、0.2～0.6g?MgSO₄·7H₂O、0.02～0.15gNa₂PO₄·7H₂O、0.01～0.05g?CaCl₂、0.01～0.05g?FeSO₄·7H₂O、0.01～0.04g腺嘌呤、20～60μg?VB₁。

3.根據權利要求2所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，所述的發酵培養基為每升水中含15g蔗糖、1.5g?DL-天冬酰胺、1g?KH₂PO₄、0.5g?MgSO₄·7H₂O、0.1gNa₂PO₄·7H₂O、0.01g?CaCl₂、0.01g?FeSO₄·7H₂O、0.0275g腺嘌呤、50μg?VB₁。

4.根據權利要求2所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，所述分離純化依次包括以下步驟：

(1)制備的發酵液通過萃取劑體積比1:1萃取，萃取液在100～2000Pa，30～55℃的條件下減壓蒸餾，去除萃取劑，得到活性化合物粗制品；所述萃取劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚中的任意一種；

(2)將粗制品通過甲醇溶解，按照粗制品與層析樹脂A質量比1:10～20上樣，使用體積濃度20%、40%、60%、80%、100%甲醇水溶液梯度洗脫，每個濃度洗脫3～5柱體積，收集合并活性化合物組分并在100～2000Pa，30～55℃的條件下減壓蒸餾濃縮收集的層析組分，得濃縮產物一；

(3)步驟(2)中獲得的濃縮產物一通過甲醇溶解，按照粗制品與層析樹脂B質量比1:10～20上樣，使用體積濃度20%、40%、60%、80%、100%甲醇水溶液梯度洗脫，每個濃度洗脫3～5柱體積，收集合并含活性化合物組分并在100～2000Pa，30～55℃的條件下減壓蒸餾，得濃縮產物二；

(4)步驟(3)中獲得的濃縮產物二通過甲醇溶解，按照粗制品與層析樹脂C質量比1:10～20上樣，使用體積20%、40%、60%、80%、100%甲醇水溶液梯度洗脫，每個濃度洗脫3～5柱體積，收集合并含活性化合物組分并在100～2000Pa，30～55℃的條件下減壓蒸餾獲得純物質。

5.根據權利要求4所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述的層析樹脂A為市售D101、LX-60非極性大孔樹脂。

6.根據權利要求4所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的層析樹脂B為市售MCI?GEL?CHP20P?MCI系列精細層析樹脂。

7.根據權利要求4所述的活性化合物的發酵制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的層析樹脂C為市售十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)非極性層析樹脂。