[發明專利]一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法有效
| 申請號: | 201410084487.6 | 申請日: | 2014-03-10 |
| 公開(公告)號: | CN103898239A | 公開(公告)日: | 2014-07-02 |
| 發明(設計)人: | 陳奕磊;黎洪奮;王淑一 | 申請(專利權)人: | 上海艾迪康醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號: | C12Q1/70 | 分類號: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司: | 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100 | 代理人: | 黎雙華 |
| 地址: | 200237 上海市*** | 國省代碼: | 上海;31 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 檢測 htlv ii 病毒 引物 方法 | ||
技術領域
本發明屬于醫學檢驗領域,具體涉及一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法。
背景技術
人類T淋巴細胞白血病病毒(Human?T-cell?lymphotropic?virus,?HTLV)是1980年美國人Gallo首先從皮膚型T細胞淋巴瘤患者體內發現的第一種人類逆轉錄病毒,按基因組學及血清學反應可分為1型(HTLV-I)和2型(HTLV-II)。該病毒為球型顆粒,內部由RNA核蛋白及圍繞在外的20面體蛋白衣殼組成,最外層具有包膜結構,表面鑲嵌有糖蛋白。目前全世界大約1000到2000萬人感染HTLV病毒,而在我國的北京、廣西、江西、新疆、柳州、合肥和四川等10多個省市已發現了HTLV感染病例,同時某些沿海地區也出現了局部小規模流行。
????HTLV感染細胞主要通過細胞間感染的方式,游離病毒顆粒是沒有感染能力的。HTLV感染細胞與未感染細胞建立突觸,進而使病毒蛋白和RNA染色體組進入靶細胞。通過逆轉錄酶使病毒RNA逆轉錄為cDNA,同時這種前病毒DNA被整合到宿主細胞,最終引起成人T細胞白血病、熱帶痙攣性癱瘓及其他相關神經疾病的產生。
HTLV病毒的傳播途徑主要有輸血傳播、母乳傳播及性傳播三種,而迄今有效的治療藥物和預防性疫苗尚未研制成功。因此,唯一積極的控制辦法就是及時發現HTLV感染者,并采取措施切斷其傳播途徑。
目前較為常用的檢測方法是采用ELISA法檢測HTLV抗體,其它還有間接免疫熒光法、蛋白印跡試驗及重組免疫印記等。但研究顯示并非所有的HTLV感染者都會產生抗體,且血液標本中尚存在單細胞感染,因此血清學檢測存在一些假陽性和假陰性問題,特異性較差,無法很好地解決上述問題。本檢測方法在血清學變化之前即可檢測是否有HTLV感染,大幅度縮短了窗口期,同時相對于常規的血清學檢測方法具有檢測周期短,特異性高,準確度高,靈敏度高,條件依賴少,污染風險低等優點。檢測結果將有助于臨床篩選,監測患者HTLV前病毒載量的變化及限制HTLV病毒的傳播。
發明內容
本發明的目的在于提供一種用于檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物,包括檢測HTLV-I前病毒的特異性引物(SEQ?NO1和SEQ?NO2)及探針(SEQ?NO3)和檢測HTLV-II前病毒的特異性引物(SEQ?NO4和SEQ?NO5)及探針(SEQ?NO6),其中:
(i)?????檢測HTLV-I前病毒的特異性引物及探針:
SEQ?NO1:CCCATTGGCTCCTGTGAAAG;
SEQ?NO2:TTGAGACAGCGCCACGAAC;
SEQ?NO3:JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA
(ii)????檢測HTLV-II前病毒的特異性引物及探針:
SEQ?NO4:TTGCCATACCTGTCAAACCATC;
SEQ?NO5:CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC;
SEQ?NO6:FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA。
進一步地,在檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒時,所述的引物同時被使用,并被放置在同一個反應管中。
進一步地,在總反應體積為25ul時,引物和探針的使用量為:引物SEQ?NO1、SEQ?NO?2、SEQ?NO4、SEQ?NO?5各0.6ul、探針SEQ?NO3和SEQ?NO?6各0.3?ul。
進一步地,所述的引物參與的反應程序為95℃?5min預變性;95℃?15s,59℃?35s循環40次。
本發明還提供一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的方法,包括:
(1)提取樣本中的DNA;
(2)以步驟(1)中的DNA作為模板,在同一PCR管同時加入檢測HTLV-I前病毒的引物及探針和檢測HTLV-II前病毒的引物及探針,并通過Real-time?PCR反應對樣本進行檢測,其中:
(i)???檢測HTLV-I前病毒的特異性引物及探針:
SEQ?NO1:CCCATTGGCTCCTGTGAAAG;
SEQ?NO2:TTGAGACAGCGCCACGAAC;
SEQ?NO3:JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA
(ii)??檢測HTLV-II前病毒的特異性引物及探針:
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于上海艾迪康醫學檢驗所有限公司,未經上海艾迪康醫學檢驗所有限公司許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服】
本文鏈接:http://www.szxzyx.cn/pat/books/201410084487.6/2.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。





