[發明專利]一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法有效

申請號：	201410084487.6	申請日：	2014-03-10
公開（公告）號：	CN103898239A	公開（公告）日：	2014-07-02
發明（設計）人：	陳奕磊;黎洪奮;王淑一	申請（專利權）人：	上海艾迪康醫學檢驗所有限公司
主分類號：	C12Q1/70	分類號：	C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
代理公司：	浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100	代理人：	黎雙華
地址：	200237 上海市***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種檢測 htlv ii 病毒引物方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于醫學檢驗領域，具體涉及一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法。

背景技術

人類T淋巴細胞白血病病毒（Human?T-cell?lymphotropic?virus,?HTLV）是1980年美國人Gallo首先從皮膚型T細胞淋巴瘤患者體內發現的第一種人類逆轉錄病毒，按基因組學及血清學反應可分為1型（HTLV-I）和2型（HTLV-II）。該病毒為球型顆粒，內部由RNA核蛋白及圍繞在外的20面體蛋白衣殼組成，最外層具有包膜結構，表面鑲嵌有糖蛋白。目前全世界大約1000到2000萬人感染HTLV病毒，而在我國的北京、廣西、江西、新疆、柳州、合肥和四川等10多個省市已發現了HTLV感染病例，同時某些沿海地區也出現了局部小規模流行。

????HTLV感染細胞主要通過細胞間感染的方式，游離病毒顆粒是沒有感染能力的。HTLV感染細胞與未感染細胞建立突觸，進而使病毒蛋白和RNA染色體組進入靶細胞。通過逆轉錄酶使病毒RNA逆轉錄為cDNA，同時這種前病毒DNA被整合到宿主細胞，最終引起成人T細胞白血病、熱帶痙攣性癱瘓及其他相關神經疾病的產生。

HTLV病毒的傳播途徑主要有輸血傳播、母乳傳播及性傳播三種，而迄今有效的治療藥物和預防性疫苗尚未研制成功。因此，唯一積極的控制辦法就是及時發現HTLV感染者，并采取措施切斷其傳播途徑。

目前較為常用的檢測方法是采用ELISA法檢測HTLV抗體，其它還有間接免疫熒光法、蛋白印跡試驗及重組免疫印記等。但研究顯示并非所有的HTLV感染者都會產生抗體，且血液標本中尚存在單細胞感染，因此血清學檢測存在一些假陽性和假陰性問題，特異性較差，無法很好地解決上述問題。本檢測方法在血清學變化之前即可檢測是否有HTLV感染，大幅度縮短了窗口期，同時相對于常規的血清學檢測方法具有檢測周期短，特異性高，準確度高，靈敏度高，條件依賴少，污染風險低等優點。檢測結果將有助于臨床篩選，監測患者HTLV前病毒載量的變化及限制HTLV病毒的傳播。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物，包括檢測HTLV-I前病毒的特異性引物（SEQ?NO1和SEQ?NO2）及探針（SEQ?NO3）和檢測HTLV-II前病毒的特異性引物（SEQ?NO4和SEQ?NO5）及探針（SEQ?NO6），其中：

(i)?????檢測HTLV-I前病毒的特異性引物及探針：

SEQ?NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ?NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ?NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii)????檢測HTLV-II前病毒的特異性引物及探針：

SEQ?NO4：TTGCCATACCTGTCAAACCATC；

SEQ?NO5：CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC；

SEQ?NO6：FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA。

進一步地，在檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒時，所述的引物同時被使用，并被放置在同一個反應管中。

進一步地，在總反應體積為25ul時，引物和探針的使用量為：引物SEQ?NO1、SEQ?NO?2、SEQ?NO4、SEQ?NO?5各0.6ul、探針SEQ?NO3和SEQ?NO?6各0.3?ul。