[發明專利]一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物和方法

有效

• 申請號: 201410084487.6
• 申請日: 2014-03-10
• 公開（公告）號: CN103898239A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 陳奕磊;黎洪奮;王淑一
• 申請（專利權）人: 上海艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黎雙華

1.一種用于檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的引物，包括檢測HTLV-I前病毒的特異性引物（SEQ?NO1和SEQ?NO2）及探針（SEQ?NO3）和檢測HTLV-II前病毒的特異性引物（SEQ?NO4和SEQ?NO5）及探針（SEQ?NO6），其中：

(i)????檢測HTLV-I前病毒的特異性引物及探針：

SEQ?NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ?NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ?NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii)???檢測HTLV-II前病毒的特異性引物及探針：

SEQ?NO4：TTGCCATACCTGTCAAACCATC；

SEQ?NO5：CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC；

SEQ?NO6：FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA。

2.根據權利要求1所述的引物，其特征在于，在檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒時，所述的引物同時被使用，并被放置在同一個反應管中。

3.根據權利要求1所述的引物，其特征在于，在總反應體積為25ul時，引物和探針的使用量為：引物SEQ?NO1、SEQ?NO?2、SEQ?NO4、SEQ?NO?5各0.6ul、探針SEQ?NO3和SEQ?NO?6各0.3?ul。

4.根據權利要求1所述的引物，其特征在于，所述的引物參與的反應程序為95℃?5min預變性；95℃?15s，59℃?35s循環40次。

5.一種同管檢測HTLV-I和HTLV-II前病毒的方法，其特征在于包括：

(1)提取樣本中的DNA；

(2)以步驟(1)中的DNA作為模板，在同一PCR管同時加入檢測HTLV-I前病毒的引物及探針和檢測HTLV-II前病毒的引物及探針，并通過Real-time?PCR反應對樣本進行檢測，其中：

(i)?檢測HTLV-I前病毒的特異性引物及探針：

SEQ?NO1：CCCATTGGCTCCTGTGAAAG；

SEQ?NO2：TTGAGACAGCGCCACGAAC；

SEQ?NO3：JOE-TCTCGGACTTTTGCATGGCCTCTCC-TAMARA

(ii)?檢測HTLV-II前病毒的特異性引物及探針：

SEQ?NO4：TTGCCATACCTGTCAAACCATC；

SEQ?NO5：CTGAAGAACGGCGCTGATAGTC；

SEQ?NO6：FAM-CTTCTCCGGTGCGGTTTCCGTCT-TAMARA；

(3)?根據結果來分析樣本是否感染HTLV病毒。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，Real-time?PCR的反應體系為25ul，包括2*qPCR?MIX?12.5ul、引物SEQ?NO1、SEQ?NO?2、SEQ?NO4、SEQ?NO?5各0.6ul、探針SEQ?NO3和SEQ?NO?6各0.3?ul、滅菌水7.5ul、DNA模板2?ul。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，Real-time?PCR反應程序為：95℃?5min預變性；95℃?15s，59℃?35s循環40次。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，對檢測結果分析包括：若樣本產生一條擴增曲線，且CT值≤38，則樣本為HTLV陽性，且根據相對應的探針，可判斷樣本所感染的HTLV基因型；若樣本未產生擴增曲線，則判定樣本為陰性。