[發明專利]一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應用

無效

• 申請號: 201410083459.2
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103815973A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 羅杰;湯祥軍;戴龍君;張永;張力;郭新榮;黃寬明;鄒丹丹;曹剛;魯軍體;楊明環;王娜;武高
• 申請（專利權）人: 湖北醫藥學院附屬太和醫院
• 主分類號: A61B19/00
• 分類號: A61B19/00;A61D1/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于癌癥治療技術領域，尤其涉及一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應用。

背景技術

癌癥對人類的危害日趨嚴重，平均每四位死亡病人中至少有一位死于癌癥。目前對于癌癥治療的被動消極狀態主要歸因于兩個方面：一是癌癥本身的復雜性與高度的應變性（包括對治療藥物的抗藥性）；二是治療措施的單一性（無特異性及定向性）與不可變性。一個理想的治療措施應該專一性地作用于腫瘤組織，達到以多對雜、以可變對多變，使癌癥與治療這一個矛盾的組合體在人體個性、腫瘤特性、細胞乃至分子特性各個層次上有機結合。癌癥與治療措施的動態監測是達到上述目的不可缺或的前提條件。

癌癥工作者早已認識到腫瘤組織庫的重要性，在世界范圍內建立了（或者正在建立）各種規模、多種類型的人體腫瘤組織庫。腫瘤組織庫作為寶貴的資源對癌癥的研究至關重要。但是，從這種傳統的組織庫得到的信息是腫瘤組織中已經存在的、而且是靜態的，不可能獲得與治療方案有機結合的動態信息。

發明內容

本發明的目的在于提供一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應用，旨在解決傳統的組織庫不能獲得與治療方案有機結合的動態信息，為探索具有實際意義的有效治療途徑提供強有力的實驗平臺。

本發明是這樣實現的，一種活體腫瘤組織庫的建立方法，包括以下步驟：

（1）將切取到的目的腫瘤組織預處理；

（2）將所述腫瘤組織移植至小鼠腎臟被膜下；

（3）待腫瘤生長到預定大小后，處死小鼠，在無菌條件下暴露腫瘤，獲取影像資料后切取腫瘤組織，將小鼠身上獲取的部分腫瘤組織分為兩組，其中一組進行冰凍保存；

（4）將另一組腫瘤組織重復步驟（1）和（2）進行活體組織傳代，得到活體腫瘤組織庫；或者將所述冰凍保存的腫瘤組織復蘇后重復步驟（1）和（2）進行活體組織傳代，得到活體腫瘤組織庫。

優選地，在步驟（1）中，所述腫瘤組織預處理包括：將手術切除的人體腫瘤組織立即放在無菌、低溫保存液中，去除可辨認的壞死組織；將腫瘤生長旺盛部位切成1×1×3mm的組織塊。

優選地，所述人體腫瘤為任何人體實體惡性腫瘤，包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌、胰腺癌、結腸癌、膀胱癌、腎癌、皮膚癌、甲狀腺癌、膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌、惡性膠質瘤、骨肉瘤。

優選地，在步驟（2）中，所述小鼠為鼠齡4～5周的SCID小鼠。

優選地，在步驟（2）中，所述移植包括：將小鼠在常規消毒、麻醉條件下暴露左側腎臟，于腎嵴上端用注射針頭挑起腎被膜，剪一個小口，然后用小玻璃棒剝離腎被膜至腎嵴下端，用小鑷子將腫瘤塊放于低端與上端各一塊；最后將腎臟復位、分別縫合肌肉與皮膚、常規復蘇與護理。

優選地，在步驟（3）中，所述冰凍保存包括：將腫瘤組織放在含有1%DMSO的保存液中，以每分鐘降低1度的速度降至-80℃，3小時后轉移到液氮內保存。

優選地，在步驟（4）中，所述腫瘤組織復蘇包括：將冰凍保存的腫瘤組織置于37℃水浴中復蘇。

本發明進一步提供了上述活體腫瘤組織庫在確定癌癥患者手術后個性化治療方案方面的應用。

本發明進一步提供了上述活體腫瘤組織庫在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應用。

本發明進一步提供了上述活體腫瘤組織庫在構建人體癌癥研究的動物模型方面的應用。

本發明克服現有技術的不足，提供一種活體腫瘤組織庫的建立方法及其應用，通過將人體癌癥患者手術后的腫瘤組織移植到SCID小鼠（Severe?combined?immunodeficient?mice）的腎臟被膜下，在小鼠體內存活并傳代保存，得到活體腫瘤組織庫，活體腫瘤組織庫是在單一的腫瘤組織異種移植基礎上，將眾多的人體腫瘤組織以活體組織庫（Living?tissue?bank）的形式在動物體內保存、備用。該活體腫瘤組織庫包括橫向的多種腫瘤，也包括縱向的某種腫瘤的各種亞型或者各種發展階段。該活體腫瘤組織庫具有多種用途，包括在確定癌癥患者手術后個性化治療方案方面的應用，在抗癌藥物的腫瘤特異性篩選方面的應用，以及在構建人體癌癥研究的動物模型方面的應用。

附圖說明

圖1是本發明對比實施例中小鼠腎被膜和皮下腫瘤組織生長狀況實物圖；

圖2是本發明用途實施例1中活體腫瘤組織庫用于確定癌癥患者手術后治療的個性化方案的技術路線示意圖；

圖3是本發明用途實施例2中活體腫瘤組織庫用于抗癌藥物的腫瘤特異性篩選的技術路線示意圖；