[發明專利]一種同時檢測甲型、乙型及丙型流感病毒的方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201410083254.4
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN104032034A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 王全意;楊鵬;崔淑娟;張莉;彭曉旻;張代濤;吳雙勝
• 申請（專利權）人: 王全意
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同時檢測甲型、乙型及丙型流感病毒的方法，其特征在于是含內質控的一步法多重熒光RT-PCR，其特異性引物和探針序列分別為：

1)SEQ?NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

2)SEQ?NO：3、6、9、12所示的探針。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于如SEQ?NO：3所示的甲型流感病毒的M基因探針5’端由FAM標記，3’端由BHQ1標記；如SEQ?NO：6所示的乙型流感病毒的NS基因探針5’端由JOE標記，3’端由BHQ1標記；如SEQ?NO：9所示的丙型流感病毒的NP基因探針5’端由ROX標記，3’端由BHQ2標記；如SEQ?NO：12所示的內質控基因LDHA基因探針5’端由CY5標記，3’端由BHQ2標記。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述多重熒光RT-PCR的反應體系：

a)反應緩沖液；

b)反應酶；

c)SEQ?NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

d)SEQ?N()：3、6、9、12所示的探針

e)無RNA酶的水補足體系要求的體積。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述多重熒光RT-PCR的反應條件如下：

a)四個熒光通道的設置；

b)反轉錄的溫度與時間；

c)預熱的溫度與時間；

d)熱循環(預熱溫度與時間、退火溫度與時間、熒光收集溫度、循環數)；

e)以界定的Ct值來判定檢測結果。

5.如權利要求1所述方法在檢測食品及原料、環境樣本中甲型、乙型及丙型流感病毒中的用途。

6.權利要求1所述的引物和探針序列在制備甲型、乙型及丙型流感病毒的檢測試劑中的應用。

7.一種同時檢測甲型、乙型及丙型流感病毒的試劑盒，其特征在于所述試劑盒中含有特異性引物和探針，其序列分別為：

1)SEQ?NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；

2)SEQ?NO：3、6、9、12所示的探針。

8.權利要求7所述的試劑盒在制備甲型、乙型及丙型流感病毒的診斷試劑中的應用。