[發明專利]特異性IgE抗體的檢測方法、該方法所使用的試劑盒以及該試劑盒的制備和使用方法

無效

• 申請號: 201410082987.6
• 申請日: 2014-03-07
• 公開（公告）號: CN103837674A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 李會強;朱黎娜;侯麗英;張盈瑩;楊維利;呼蓓蓓
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 楊慧玲

技術領域

本技術發明涉及一種特異性IgE抗體的檢測方法、該方法所使用的試劑盒以及該試劑盒的制備和使用方法，特異性IgE抗體的檢測方法的顯著特征是采用捕獲法-酶聯免疫分析模式，能夠根據患者病史選擇疑似過敏食物進行組合，實現“個性化組合”模式的血清特異性IgE檢測，尤其適用于因食物導致過敏的患者進行確認過敏原種類。

背景技術

食物過敏已成為一類常見的食源性疾病，可引起的主要臨床癥狀有頭暈、頭痛、胸悶、惡心、嘔吐、皮膚瘙癢等，嚴重時發生休克甚至死亡，已經引起了人們的普遍關注。具有過敏體質的機體接觸相應過敏原的情況下，誘導特異性免疫反應并產生特異性抗體（免疫球蛋白E，IgE），IgE能結合肥大細胞或嗜堿性粒細胞，并使機體處于致敏狀態，同時此種抗體也分布在血漿中。因此，血漿（清）特異性IgE（sIgE）是過敏性疾病的重要特征，臨床上常通過檢測血清中存在何種sIgE抗體來推斷或確認過敏原，也就是說，血清特異性IgE（sIgE）是確認過敏原的重要依據之一。眾所周知，導致過敏的物質種類繁雜，特別是吸入性過敏原和食入性過敏原，而測定前并不知道患者對何種過敏原過敏。因此，臨床工作需采用一系列過敏原聯合測定模式，此種方法能夠提高檢出效率，并能節省人力和物力。

因食物所致過敏反應存在某些特殊性，患者往往是食用某種食物或含有某種食物的食品情況下才會導致某些癥狀，這些食物可被患者感知。因此，食物過敏的患者往往能夠根據病史給臨床醫生提供一些有價值的信息，幫助臨床醫生鎖定幾種高度疑似的食物作為檢測對象，而不需要按照常規將所有可檢測的所有食物納入檢測范圍，這樣可以減輕患者的檢測費用，節約有限的醫學資源。

不同受檢患者病史不同，疑似需檢測過敏食物的組合不同。在此種情況下，臨床需要一種能夠實現“個性化組合”過敏原檢測試劑，滿足食物過敏性疾病患者確認過敏原的特殊要求。

現有技術中確認過敏原的血清sIgE檢測法采用免疫化學原理，即用已知抗原檢測未知抗體。

其中，放射性過敏原吸附試驗是血清sIgE檢測最經典的方法。該方法是將已知過敏原包被在固相材料（硝酸纖維膜，NC膜）表面，與待檢血清（含sIgE）溫育后，再加上放射性核素標記抗人IgE（標記二抗）溫育。如血清中含有與過敏原對應的特異性抗體，固相材料表面即形成已知抗原-待檢抗體-放射性核素標記抗人IgE復合物（如牛奶-牛奶特異性IgE-抗人IgE）；用磷酸鹽緩沖鹽水洗滌NC膜，去除未結合標記抗體。再用放射性檢測儀檢測NC膜表面是否具有放射活性即可判斷血清中是否存在特異性IgE抗體。該方法的缺陷是：放射性過敏原吸附試驗時，每次試驗只能檢測一種過敏原，不能同時檢測多種過敏原，并且此種方法存在放射性核素污染等問題，臨床已不再使用。

“膜斑點印記”是目前被臨床廣泛使用的方法之一，可同時檢測多種過敏原。此方法以“條狀”NC膜作為固相載體，以線性方式于NC膜不同物理位置包被一系列食物蛋白提取液作為已知抗原。包被有抗原的NC膜于反應池內與稀釋待檢血清溫育，血清中待檢sIgE分別與相應抗原結合；再加入酶標抗體（抗人IgE），與結合在膜表面的sIgE結合；洗滌去除游離的標記抗體，加入顯色底物即可根據NC膜的顯色條帶，結合參照標尺（過敏原包被信息）確定待檢樣本含有何種sIgE。膜斑點印記法可同時檢測10-12種食物過敏原，但組合方式固定，不能根據患者情況進行“隨機”組合，不能滿足食物過敏原“個性化組合”的要求。同時，此方法操作復雜、耗時，且不能準確測定sIgE的含量。

酶聯免疫吸附試驗因具有操作簡單、適合基層實驗室等優點，深受臨床實驗室歡迎。酶聯免疫方法也用于食物過敏原sIgE檢測，杭州浙大基因工程有限公司申請一項技術發明專利（申請號200710157167.9）公開一種酶聯免疫法：過敏原特異性IgE?ELISA檢測試劑盒及其制備方法。此項發明是用一組過敏原分別包被96孔酶標反應板特定位置（孔），但過敏原的組合方式固定。待檢稀釋血清分別加入各個反應孔內，溫育后洗板；再加入酶標抗體（抗人IgE），與結合在微孔表面的sIgE結合；洗滌去除游離的標記抗體，加入顯色底物，通過酶標儀讀取吸光度值，根據吸光度值參照標準曲線可以對待檢sIgE水平進行定量。與膜斑點印記法相比，酶聯免疫法操作簡單，結果容易判讀，但同樣采用固定組合方式，不能根據患者情況進行“隨機”組合，不能滿足食物過敏原“個性化組合”的要求。

發明內容